rhG-CSF對Aβ-,1-42-誘導Alzheimer病大鼠模型的作用研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(AD)是老年人最常見的神經變性性疾病。其核心癥狀為進行性認知功能減退。在發(fā)達國家老年人群中，為導致死亡的第四位原因，對人類健康與生命構成了嚴重的威脅，受到國內外學者的廣泛關注。迄今為止，對于AD尚無特效治療方法。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是一種重要的造血生長因子，臨床上主要用于白血病的治療。近來在治療腦缺血動物實驗中，發(fā)現(xiàn)G-CSF能明顯減小腦梗死面積，促進神經功能恢復，降低動物的死亡率，具有一定的神經保護作用

2、。但在老年癡呆中的作用，未見文獻報道。本研究主要探討G-CSF對老年癡呆模型大鼠認知障礙的改善以及抗凋亡方面的作用。 方法：(1)選用智能正常的健康雄性Wistar大鼠84只，體重250g±20g。(2)隨機分為A β組、粒細胞集落刺激因子治療組及假手術組，共3組，每組28只。(3)麻醉成功后，固定于腦立體定向儀上，頭項部正中切口暴露前囟。參照大鼠腦立體定位圖譜，A β組、粒細胞集落刺激因子治療組雙側海馬注射Aβ 1-42各5u

3、l(10ug)，假手術組雙側海馬注射生理鹽水5ul。(4)13天后，進行morris水迷宮訓練5天，記錄第五天的逃避潛伏期，Aβ組、粒細胞集落刺激因子治療組明顯高于假手術組，說明造模成功。(5)Aβ組給予皮下注射生理鹽水O.3ml/kg·d，連續(xù)7d；粒細胞集落刺激因子治療組皮下注射粒細胞集落刺激因子50μg(0.3m1)/kg·d，連續(xù)7d。并于給藥后第7、14、21、28d進行Morris水迷宮測試，記錄其逃避潛伏期和目的象限游泳距

4、離百分比。(6)每次測試后每組處死7只大鼠，灌注取腦，制作石蠟切片，并用免疫組織化學方法檢測海馬區(qū)caspase-3的表達。(7)采集圖象，計數(shù)免疫陽性細胞數(shù)，數(shù)據用SPSSl1.5 forWindows軟件包進行統(tǒng)計學處理。數(shù)據以x±s表示，采用方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結果：(1)Morris水迷宮測試結果：Morris水迷宮成績測試，隨著訓練的進行，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短。記錄第5天成績，Aβ組及粒

5、細胞集落刺激因子治療組與假手術組相比，逃避潛伏期明顯延長(P<0.01，A β組及粒細胞集落刺激因子治療組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明造膜成功；A β組及粒細胞集落刺激因子治療組在注射藥物后第7，14，21，28天分別行Morris水迷宮測試，A β組于第14、21、28d，逃避潛伏期(與第7天比較)明顯延長(P<0.05)；粒細胞集落刺激因子治療組于不同時間點逃避潛伏期相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；給予粒細胞集落刺

6、激因子治療后，粒細胞集落刺激因子治療組與Aβ組相比，于第14、21、28d逃避潛伏期明顯縮短(P<0.05)。(2)目的象限游泳距離占總距離的百分比(目的象限百分比) A β組大鼠于第21、28d，目的象限百分比(與第7天比較)明顯延長(P<0.05)；給予粒細胞集落刺激因子治療后，于第14、21、28d目的象限百分比(與第7天比較)明顯增加(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。給予粒細胞集落刺激因子治療后，粒細胞集落刺激因子治療組與Aβ

7、組相比，于第14、21、28d目的象限百分比明顯延長(P<0.05)(3)大鼠海馬組織病理學觀察及超微結構觀察：HE染色顯示，Aβ組大鼠海馬CAl區(qū)神經元數(shù)量較假手術組明顯減少，可見較多的神經細胞胞質濃染，核固縮。粒細胞集落刺激因子治療組神經元數(shù)量較A β組增多，胞質濃染神經元少見。(4)caspase-3蛋白主要在大鼠海馬CAl區(qū)錐體細胞表達，陽性反應為黃色到棕褐色，定位于胞漿，亦可見于胞膜和胞核。免疫組織化學法檢測大鼠海馬組織Cas

8、pase-3蛋白的表達：假手術組于各時間點均可見海馬區(qū)Caspase-3免疫陽性細胞表達(見圖5～8)，各時間點相比(與第七天)免疫細胞表達數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；注射A β1-42后，Aβ組、粒細胞集落刺激因子治療組與假手術組相比較各時間段大鼠海馬區(qū)Caspase-3蛋白的表達明顯增加(P<0.05)；給予粒細胞集落刺激因子后，治療組caspase-3蛋白的表達明顯降低，第7、14天較A β組明顯減少，統(tǒng)計學有顯著差異(P