rhG-CSF對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后腦組織VEGF及VEGFR2的影響.pdf

1、目的：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic—ischemicencephalopathy，HIE)是新生兒常見疾病，可導致新生兒死亡及新生兒期以后永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷，目前尚無有效的治療方法。本研究建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic—ischemicbraindamage，HIBD)模型，給予重組人粒細胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocytecolony—stimulatingfactor，rhG—

2、CSF)干預，觀察不同時間點腦組織血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)及血管內(nèi)皮生長因子受體-2(vascularendothelialgrowthfactorreceptor-2，VEGFR2)表達的變化，從而揭示G—CSF發(fā)揮神經(jīng)保護作用的可能機制，為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病開辟新的途徑。 方法：7日齡Wistar大鼠168只，雌雄不限，體重12～18g，隨機分為

3、三組：假手術(shù)對照組，HIBD模型組，rhG—CSF治療組，每組各56只。HIBD模型組和rhG—CSF治療組均先制備HIBD模型，三組均根據(jù)處死時間不同又分為7個亞組：6h組、12h組、24h組、48h組、72h組、5d組、7d組，每亞組各8只。模型采用阻斷左側(cè)頸總動脈后置于含8％O2的低氧環(huán)境中2h制備而成。治療組在HIBD后即刻給予rhG—CSF(60μg/kg)頸部皮下注射，每日一次，連續(xù)五天。各組分別于HIBD后不同時間點取腦組

4、織，假手術(shù)組也在相應時間點取腦組織，肉眼觀察腦組織大體形態(tài)變化，光鏡下觀察各組大鼠左側(cè)腦組織HE染色的病理改變，免疫組織化學方法檢測三組大鼠不同時間點左側(cè)腦組織VEGF及VEGFR2的表達。 結(jié)果：(1)新生大鼠在HIBD后出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)HIBD模型組在HIBD后各時間點肉眼觀腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變，而rhG—CSF治療組各時間點腦組織大體形態(tài)基本正常。(3)HE染色：假手術(shù)組各時間點腦組織細胞層次

5、清楚、細胞形態(tài)正常；HIBD模型組在HIBD后6h、12h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細胞水腫、變性，24h、48h神經(jīng)細胞出現(xiàn)不同程度的壞死，細胞核碎裂、溶解，72h細胞壞死更明顯，至5d、7d時神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，膠質(zhì)細胞增生，細胞排列紊亂。rhG—CSF治療組各時間點腦組織病理變化較HIBD模型組明顯減輕，細胞排列尚規(guī)則。(4)VEGF和VEGFR2的表達：VEGF和VEGFR2陽性表達均呈棕黃色細顆粒沉積，陽性細胞可表達于大腦皮層和海馬，

6、陽性著色主要位于神經(jīng)細胞胞漿及突起。假手術(shù)組各時間點腦組織均無明顯VEGF及VEGFR2陽性表達；HIBD模型組腦組織VEGF及VEGFR2陽性表達在HIBD后逐漸增加，均于24-48h達高峰，以后逐漸下降，不同時間點比較，VEGF，VEGFR2陽性表達差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)，與假手術(shù)組相比，各時間點HIBD模型組VEGF，VEGFR2陽性表達均明顯增加，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；rhG—CSF治療組各時間點腦組織

7、均可見明顯的VEGF，VEGFR2陽性表達，與HIBD模型組和假手術(shù)組分別相比，各時間點治療組VEGF，VEGFR2表達均明顯增加，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。(5)新生大鼠HIBD后腦組織VEGF和VEGFR2的表達成直線正相關(guān)關(guān)系(r=0．778，P＜0.01)。 結(jié)論：(1)新生大鼠HIBD后給予rhG—CSF治療可減輕腦組織的病理改變，提示rhG—CSF對新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護作用。(2)新生大鼠HIBD后