新型胍基蛋白折疊色譜固定相的合成及其對(duì)rhG-CSF的復(fù)性純化研究.pdf

1、蛋白質(zhì)復(fù)性技術(shù)是生物工程下游的熱門(mén)技術(shù)之一。本實(shí)驗(yàn)合成了以精氨酸和肌酸為端基的兩種新型胍基蛋白折疊色譜固定相，深入研究了精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相的色譜性能，并將其應(yīng)用于含有兩對(duì)二硫鍵的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocytecolony—stimulatingfactor，rhG—CSF)的復(fù)性純化研究中。本文主要包括以下4個(gè)部分： 1、文獻(xiàn)綜述：簡(jiǎn)要介紹了蛋白質(zhì)復(fù)性的意義及一般過(guò)程

2、，詳細(xì)論述了蛋白折疊液相色譜法，總結(jié)了色譜固定相及精氨酸對(duì)于蛋白折疊的作用，綜述了rhG—CSF復(fù)性純化的研究進(jìn)展。包括58篇文獻(xiàn)。 2、以硅膠為基質(zhì)，合成了以精氨酸和肌酸為末端的兩種新型胍基蛋白折疊色譜固定相。用5種標(biāo)準(zhǔn)酸性蛋白比較了其色譜分離性能，發(fā)現(xiàn)精氨酸型色譜固定相的色譜性能更好。 3、探討了在不同pH值，不同流速條件下5種酸性蛋白在精氨酸型胍基色譜固定相上的分離情況；測(cè)定蛋白在柱上的質(zhì)量回收率大于95％；在選用

3、BSA為模型蛋白時(shí)測(cè)定柱填料的最大吸附量大于46.1mg/g。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該種精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相具有典型的陰離子交換性質(zhì)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白具有很好的分離效果，柱容量大，非特異性吸附小。 4、利用合成的精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相對(duì)在大腸桿菌中表達(dá)的rhG—CSF進(jìn)行了復(fù)性純化，研究了不同的梯度、pH值、脲濃度及流速對(duì)rhG—CSF復(fù)性的影響。在最優(yōu)條件下，30分鐘內(nèi)通過(guò)一步復(fù)性純化得到了純度為95.24％，質(zhì)量回收率為