rhG-CSF抑制血管損傷后新生內(nèi)膜增生的實驗研究.pdf

1、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是世界上最常見的心臟病，有高的發(fā)病率和死亡率，嚴重威脅到了人類的健康。PTCA（percutaneous transluminal coronary angioplasty PTCA）和支架安置術是目前冠心病血管重建治療的主要手段，但術后再狹窄的發(fā)生極大的限制了其遠期療效。已知正常條件下血管內(nèi)皮產(chǎn)生各種各樣的物質(zhì)來調(diào)節(jié)血管緊張度、保護血管壁，血管損傷時表現(xiàn)為有效的血管舒張性活性的降低，抗粘附物質(zhì)的減少，及伴發(fā)的血

2、管收縮物質(zhì)的增加，從而導致血管緊張度的增加，炎性細胞和血小板的粘附，中層平滑肌細胞的遷移和增殖，這都增加了血栓形成和脈管阻塞及新生內(nèi)膜形成的危險。已有實驗證實新生內(nèi)膜增生程度與內(nèi)皮剝脫范圍成正比，平滑肌細胞及新生內(nèi)膜異常增生的情況往往存在于損傷后沒有內(nèi)皮化或內(nèi)皮化延遲的區(qū)域。而新生內(nèi)膜的形成是血管再通術（如血管成形術，支架術和旁路移植術）后再狹窄的病理基礎，因此內(nèi)皮細胞功能和結(jié)構(gòu)的完整性對于預防血管損傷后再狹窄至關重要。 修復

3、受損的內(nèi)皮細胞是防治損傷性血管疾病的重要靶點，重組人粒細胞集落刺激因子（recombinant huanm granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF）被證明可以刺激骨髓內(nèi)皮祖細胞（endothelial progenitor cells，EPCs）釋放到外周血，而EPCs己經(jīng)證明可以參與損傷組織血管的新生，因此rhG-CSF介導的內(nèi)皮祖細胞的動員對于血管損傷后早期的內(nèi)皮化及阻止新生內(nèi)膜

4、的形成可能有治療性的作用。然而，目前rhG-CSF在抑制損傷血管新生內(nèi)膜形成中的治療作用研究的極少，對其治療效果也存在爭議。 由于在心血管疾病及其危險因素（如：動脈粥樣硬化，高脂血癥等）存在的情況下內(nèi)皮祖細胞的功能會有所改變，因此，本試驗在建立動脈粥樣硬化大鼠模型的基礎上，行頸總動脈球囊損傷術，應用rhG-CSF進行術前干預，觀察其對動脈粥樣硬化血管損傷后內(nèi)皮再生的影響及對新生內(nèi)膜增生的影響。 第一部分大鼠動脈粥樣硬化

5、模型的建立 目的：建立大鼠動脈粥樣硬化模型，使疾病模型更接近人類。 方法： 14大鼠隨機分為兩組：普食組和高脂組。普食組給予普通飲食,高脂組采用大劑量VitD3灌胃+高脂飲食的方法建立Wistar大鼠動脈粥樣硬化模型。高脂飲食后一月測定外周血血脂和血鈣水平，同時在光鏡和透射電鏡下觀察血管壁形態(tài)改變。 結(jié)果：高脂組大鼠血脂、血鈣水平顯著升高（p<0.01），光鏡和電鏡下血管壁均可見泡沫樣細胞和鈣鹽沉積等動脈粥樣硬

6、化病變。 結(jié)論：在大劑量VitD3灌胃基礎上飼高脂飼料能造成大鼠動脈粥樣硬化模型。 第二部分重組人粒細胞集落刺激因子對動脈粥樣硬化大鼠頸總動脈球囊損傷后再內(nèi)皮化的影響 目的：在大鼠動脈粥樣硬化的基礎上，觀察rhG-CSF皮下注射對損傷血管再內(nèi)皮化的影響并研究其機制。 方法： 66 只大鼠隨機分為2組：普食組和AS組，AS組又隨機分為：rhG-CSF＋AS損傷組、NS+AS損傷組。普食組和rhG-CSF＋A

7、S損傷組皮下注射rhG-CSF共6d，NS+AS損傷組皮下注射NS共6天。然后行左頸總動脈球囊拉傷術。采用光鏡及掃描電鏡觀察不同時間點損傷血管內(nèi)皮再生情況，采用流式細胞儀觀察外周血EPCs數(shù)量，采用酶聯(lián)免疫分析法觀察外周血IL-6、TNF-α表達水平的變化。 結(jié)果：經(jīng)rhG-CSF干預后，與NS干預組相比損傷血管再內(nèi)皮化明顯加速。損傷后16天rhG-CSF干預組內(nèi)皮再生面積占血管腔面積百分比較NS組明顯增加（0.93±0.05

8、1 VS 0.20±0.033，P<0.01）。同時rhG-CSF干預組血EPCs數(shù)量明顯增加，而炎性因子的水平較NS干預組明顯減少。 結(jié)論： AS大鼠皮下注射rhG—CSF后可以使損傷血管內(nèi)皮細胞更快恢復連續(xù)性，rhG—CSF可能通過增加外周血EPCs數(shù)量，抑制炎性因子（IL－6、TNF-α）的表達，參與了內(nèi)皮細胞再生，內(nèi)膜的修復過程。通過皮下注射rhG—CSF使內(nèi)皮細胞缺損區(qū)域重新覆蓋上內(nèi)皮細胞成為可能，對抑制損傷血管新生

9、內(nèi)膜的增生具有重要的治療意義。 第三部分重組人粒細胞集落刺激因子對動脈粥樣硬化大鼠頸總動脈球囊損傷后新生內(nèi)膜增生的影響 目的：觀察rhG-CSF皮下注射對AS大鼠血管損傷后新生內(nèi)膜增生的影響。 方法： 72只大鼠隨機分為球囊損傷NS組、球囊損傷rhG－CSF組，術前分別予以皮下注射rhG-CSF/NS干預，然后行左頸總動脈球囊拉傷術，光鏡下觀察損傷后不同時間點新生內(nèi)膜增生情況。 結(jié)果：球囊損傷rhG－