阿托伐他汀在血管內(nèi)皮保護(hù)中的作用及機制的探討.pdf

1、他汀類藥物即3-羥基3-甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑，臨床和基礎(chǔ)實驗已證明其在降低膽固醇同時，還具有調(diào)脂外改善血管內(nèi)皮功能、抗炎等作用，對AS的發(fā)生發(fā)展具有明顯的抑制，但其調(diào)脂外作用的具體機制尚不完全明確。目前在心血管領(lǐng)域研究比較多的有2條通路：PPARγ和核因子-кB(nuclear factor-kappa B，NF-кB)。有研究報道PPAR γ和NF-кB均參與了AS的進(jìn)展，Straus等認(rèn)為PPAR γ被其配體激動后可通過NF

2、-кB途徑起到其抑制血管炎癥反應(yīng)進(jìn)而抗AS的作用。既往研究顯示他汀類藥物能夠通過單核/巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞PPARγ與NF-кB相互作用，起到抗AS的作用，但他汀類藥物是否可通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞PPARγ進(jìn)而抑制NF-кB途徑改善血管內(nèi)皮功能未見明確報道。 本研究擬采用1) 通過應(yīng)用不同濃度的阿托伐他汀(atorvastatin，ATV) 作用于經(jīng)脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)這一炎性因素刺激的人臍靜脈內(nèi)皮

3、細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，以觀察其是否可通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞PPAR γ進(jìn)而抑制NF-κB途徑改善血管內(nèi)皮功能。2)通過臨床觀察，將不同劑量的ATV應(yīng)用于血脂正常的高血壓患者，觀察其肱動脈血流介導(dǎo)的血管舒張功能(flow-mediateddilation，F(xiàn)MD)以及血清中一氧化氮(nitric oxide，NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismu

4、tase，SOD)、可溶性細(xì)胞間黏附分子-1 (solubleintracellular adhesion molecule-1，sICAM-1)含量的變化，以探討他汀類藥物調(diào)脂外對血管內(nèi)皮功能的作用。第一部分不同濃度阿托伐他汀對脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作用和機制的探討研究目的：應(yīng)用不同濃度ATV干預(yù)經(jīng)LPS刺激的HUVECs，以觀察ATV是否能改善血管內(nèi)皮功能，并探討相關(guān)作用機制。 材料與方法： 建立HUVECs體

5、外培養(yǎng)模型，將體外培養(yǎng)的2～4代HUVECs分為兩部分，實驗一分成：①對照組(1組)；②LPS組(2組，1.0μg/ml)；③LPS+ATV1組(3組，LPS1 μg/ml，ATV 1.0μM)；④LPS+ATV2組(4組，LPS 1μg/ml，ATV 5.0μM)，經(jīng)孵育24小時后，收集細(xì)胞和培液，觀察不同濃度ATV干預(yù)對LPS誘導(dǎo)后HUVECs的PPAR γ、NF．K-κ B-p65、 eNOS、ICAM-1、E-selectin表

6、達(dá)及培液中NO、sICAM-1、sE-selectin含量及SOD活性的影響。實驗二分成：①對照組(1組)；②LPS+ATV2組(2組，LPS 1μg/ml，ATV5.0μM)；③GW9662+LPS+ATV2組(3組，GW9662 0.2μM，LPS1μg/ml，ATV 5.0μM)，觀察PPAR γ特異性阻斷劑GW9662對ATV與LPS共同作用后HUVECS的PPAR γ、NF-κB B-p65、 eNOS、ICAM-1、E-se

7、lectin表達(dá)及培液中NO、sICAM-1、sE-selectin含量及SOD活性的變化。應(yīng)用硝酸還原酶法測定細(xì)胞培液中NO的含量，黃嘌呤氧化酶法測定培液中SOD活性的變化，ELISA方法測定培液中sICAM-1、sE-selectill含量，應(yīng)用RT-PCR及Western Blot方法測定HUVECs的PPAR γ、NF-κ B-p65表達(dá)，RT-PCR方法測定eNOS、ICAM-1、E-selectin表達(dá)。 結(jié)果：

8、 1．人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定于體外培養(yǎng)HUVECs，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察及免疫熒光鑒定，為HUVECs。 2.實驗一結(jié)果2.1 LPS可使培液中NO含量降低，SOD活性下降，sICAM-1、sE-selectin含量增加。 2.2 ATV1.0μM可使培液中NO、SOD較第2組增加，sICAM-1含量較第2組減少，但sE-selectin含量較2組無變化；ATV 5.0μM可使培液中NO、SOD較第2組明顯增加，sIC

9、AM-1含量較第2組減少，sE-selectin含量亦無變化；不同濃度ATV組間 NO及SOD的增加有統(tǒng)計學(xué)差異；sICAM-1減少有統(tǒng)計學(xué)差異，表明ATV的作用具有劑量依賴性；但ATV對培液中sE-selectin含量無影響。 2.3 LPS對HUVECS的PPARγ及eNOS表達(dá)無影響，但可上調(diào)NF-K B-P65、ICAM-1、E-Selectin表達(dá)； 2.4不同濃度ATV可上調(diào)HUVEC S的PPARγ表達(dá)；下

10、調(diào)由LPS誘導(dǎo)的HUVEC S的NF-кB．p65、ICAM-1表達(dá)，且具有劑量依賴性；對eNO S、E-selectin表達(dá)無影響。 3．實驗二結(jié)果3.1 PPARγ特異性阻斷劑GW9662可使ATV與LPS共同作用后HUVECs培液中NO含量減少，SOD活性降低，sICAM-1含量增加。表明應(yīng)用GW9662后，ATV通過激活PPARγ所致HUVECs的NO、SOD生成增加， sICAM-1分泌減少的作用被抑制，推測ATV可能

11、通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞PPAR γ進(jìn)而抑制NF-кB途徑改善血管內(nèi)皮功能。 3.2 PPAR γ特異性阻斷劑GW9662阻斷了ATV所致HUVECS的PPAR γ表達(dá)：同時ATV對LPS上調(diào)的HUVECs的NF-кB-p65、ICAM-1表達(dá)抑制作用明顯降低；而對eNOS表達(dá)無影響。表明ATV抑制NF-кB-p65表達(dá)部分是通過激活PPARк途徑進(jìn)行的。 結(jié)論： 1．不同濃度ATV可上調(diào)HUVECs的PPARγ表達(dá)

12、，下調(diào)由于LPS誘導(dǎo)的HUVEC S的NF-кB-p65、ICAM-1表達(dá)，并具有劑量依賴性；但對eNOS、E-selectin表達(dá)無影響。 2．不同濃度ATV可干預(yù)LPS誘導(dǎo)的HUVECs的液中NO生成及SOD活性，減少sICAM-1含量，并具有劑量依賴性，但對sE-selectin無影響，同時本實驗顯示ATV促進(jìn)HUVECsNO的釋放與eNOS表達(dá)量無關(guān)。表明ATV有保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用，并具有劑量依賴性。 3．P

13、PARγ特異性阻斷劑GW9662可部分阻斷ATV上述作用，由此推測ATV可能通過激活PPARγ途徑進(jìn)而抑制NF-кB表達(dá)起到改善血管內(nèi)皮功能的作用。關(guān)鍵詞：動脈粥樣硬化阿托伐他汀人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞過氧化物酶增殖體激活受體γ核因子-κB第二部分不同劑量阿托伐他汀對血脂正常高血壓患者血管內(nèi)皮功能的影響研究目的： 探討應(yīng)用不同劑量ATV治療后，對血脂正常高血壓患者內(nèi)皮依賴性血管舒張功能(FMD)改善作用，及對血清中NO、SOD、slCA

14、M-1含量變化的影響。 資料與方法： 55例血脂正常輕、中度高血壓患者隨機分成ATV10 mg治療組25例(年齡61.4±11.8歲)，ATV 20 mg治療組30例(年齡62.8±8.3歲)，正常對照組25例(年齡60.8±6.6歲)。比較治療4周前后應(yīng)用超聲檢測肱動脈血流介導(dǎo)的血管舒張功能(flow-mediated dilation，F(xiàn)MD)和內(nèi)皮非依賴性血管舒張功能(endothelium-independent

15、dilatation，EID)的變化；比較4周前后血清中NO、SOD、sICAM-1含量變化。 結(jié)果： 1．與正常血壓組相比，EH患者肱動脈FMD明顯減弱(p<0.01)，但EID無明顯差異；血清NO、SOD水平顯著降低(P<0.01)，sICAM-1明顯增高(p<0.01)。 2．EH患者肱動脈FMD進(jìn)行單因素相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)其與血清NO、SOD成正相關(guān)，與sICAM-1成負(fù)相關(guān)；與年齡、性別、血壓、體質(zhì)量指數(shù)無顯

16、著相關(guān)。多元逐步回歸分析顯示血清NO、SOD、sICAM-1 是影響肱動脈 FMD 的主要因素，多元線性逐步回歸方程為：Y=6.593+0.039NO+0.019SOD+0.046 sICAM-1，有統(tǒng)計學(xué)意義。 3．分別應(yīng)用10 mg和20 mg的ATV治療4周后，血脂正常EH患者肱動脈FMD明顯改善；血清NO含量、SOD活性明顯增加：均具有劑量依賴性。血清sICAM-1 明顯降低，但無劑量依賴性。 結(jié)論： 1