同種腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)小鼠抗肺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫效應(yīng)研究.pdf

1、目前，肺癌的發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)均居癌癥之首。20世紀(jì)90年代與70年代相比，我國肺癌的死亡率上升了111.85％。肺癌的治療仍以手術(shù)切除為主，輔以化療和放療，但轉(zhuǎn)移和死亡率仍居高不下，這也是肺癌治療失敗的原因，因此，研究新的肺癌治療方法顯得非常必要。隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，以免疫治療為代表的腫瘤生物治療受到了人們的高度重視，已經(jīng)成為繼手術(shù)、化療和放療以后的第四種腫瘤治療模式，它主要通過調(diào)動(dòng)或增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)部固

2、有的抗腫瘤能力來抑制腫瘤生長，可以避免當(dāng)前腫瘤治療模式的嚴(yán)重不足之處，展示了良好的臨床應(yīng)用前景。
　　 肺癌的靶向治療是生物治療的一種模式，目前已有研制成功和上市的肺癌的靶向治療藥物，大多是一些單克隆抗體制劑，包括Iressa、Tarceva、Veenat、Sutent和Sorafenib Nexavar等，基本上也都是靶向腫瘤血管上的特異性蛋白分子。雖然這些藥物在一定程度上抑制了肺癌的生長，延長了患者的生存期。但是大量的循證醫(yī)

3、學(xué)研究證實(shí)，它們的療效不盡人意。長期使用單克隆抗體還會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，并且價(jià)格昂貴，這些都限制了它們的臨床使用。
　　 以腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的主動(dòng)免疫治療維持的時(shí)間較長，無需頻繁的反復(fù)給藥；且特異性的體液免疫反應(yīng)或細(xì)胞免疫反應(yīng)副作用較小，所以誘導(dǎo)抗腫瘤血管的主動(dòng)免疫效應(yīng)是一種更有效的治療方法。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞處于活躍增殖狀態(tài)，其細(xì)胞膜上表達(dá)多種與細(xì)胞增殖相關(guān)的特異性蛋白分子，是血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖相關(guān)抗原，如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長

4、因子受體Ⅱ（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor，VEGFR-Ⅱ）、整合素av（CD51）、組織因子、Endoglin（CD105）等，這些蛋白分子在體內(nèi)靜止期的血管內(nèi)皮細(xì)胞上卻不表達(dá)。研究表明，利用體外培養(yǎng)的增殖活躍的異種血管內(nèi)皮細(xì)胞制備疫苗，可以成功打破免疫耐受，誘導(dǎo)抗腫瘤血管生成。近來，用異種血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白和DNA分子疫苗相關(guān)研究較多，以同種蛋白和DNA分子疫苗也有報(bào)道，

5、但由于引起的超敏反應(yīng)、單一靶點(diǎn)的治療效果的局限性，備受爭議，尋找多靶點(diǎn)治療且副作用少的主動(dòng)免疫治療方法勢在必行。
　　 本研究對(duì)來源于微血管的小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞bEnd.3進(jìn)行體外培養(yǎng)，制備疫苗，免疫小鼠并觀察其對(duì)肺癌皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移癌的抗腫瘤效應(yīng)。另一方面，本研究應(yīng)用小鼠bEnd.3制備抗原，沖擊樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cells，DCs），觀察其誘導(dǎo)的體內(nèi)外特異性抗腫瘤血管生成的免疫反應(yīng)，并初步探索其機(jī)制，試圖尋

6、找一種新的抗腫瘤血管治療方法。人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）來源于大的靜脈血管，多項(xiàng)研究報(bào)道異種HUVEC有抗腫瘤血管生成的作用，因此，本研究用異種HUVEC和同種小鼠成纖維細(xì)胞（NIH3T3）作對(duì)照，來觀察不同來源的兩個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗腫瘤血管生成作用。
　　 第一部分同種bEnd.3細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)小鼠抗肺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞的免疫效應(yīng)。
　　

7、第一章同種bEnd.3細(xì)胞的培養(yǎng)及疫苗制備。
　　 第二章同種bEnd.3疫苗誘導(dǎo)小鼠對(duì)Lewis肺癌皮下移植瘤免疫效應(yīng)檢測。
　　 第三章同種bEnd.3疫苗誘導(dǎo)小鼠對(duì)宮頸癌U14肺轉(zhuǎn)移癌的免疫效應(yīng)檢測。
　　 第二部分同種bEnd.3細(xì)胞抗原致敏DCs誘導(dǎo)小鼠對(duì)肺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞的免疫效應(yīng)。
　　 第一章小鼠bEnd.3抗原制備和小鼠骨髓源DCs培養(yǎng)及鑒定。
　　 第二章負(fù)載bEnd.3抗原的D

8、Cs對(duì)體外增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響。
　　 第三章 bEnd.3抗原負(fù)載的DCs疫苗誘導(dǎo)小鼠對(duì)Lewis肺癌皮下移植瘤免疫效應(yīng)檢測。
　　 結(jié)論:
　　 1.同種小鼠bEnd.3細(xì)胞疫苗和負(fù)載小鼠bEnd.3抗原的DCs疫苗可抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤和小鼠宮頸癌U14肺轉(zhuǎn)移癌的生長和轉(zhuǎn)移，延長了小鼠生存期，預(yù)防組抑瘤效果優(yōu)于治療組。
　　 2.抑瘤效應(yīng)機(jī)制是在體內(nèi)誘導(dǎo)形成靶向增殖血管內(nèi)皮細(xì)胞的CT

9、Ls，誘導(dǎo)產(chǎn)生了抗VEGFR-Ⅱ抗體、抗Endoglin抗體和抗整合素av抗體等血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖相關(guān)抗體，誘導(dǎo)了抗腫瘤血管的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，抑制腫瘤的生長。
　　 3.內(nèi)皮細(xì)胞疫苗能延長傷口愈合時(shí)間，但不影響其最終愈合。
　　 4.同種bEnd.3疫苗和異種HUVEC疫苗均能誘導(dǎo)抗腫瘤血管的主動(dòng)免疫反應(yīng)，二者抑瘤作用無明顯差異。
　　 5.bEnd.3的兩種疫苗形式之間的抑瘤作用有差異，整個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞疫苗較