利用16S rDNA序列分析鑒定油菜內(nèi)生細(xì)菌研究.pdf

1、　　本試驗從健康油菜植株的不同組織器官中分離到大量內(nèi)生細(xì)菌，這些細(xì)菌菌落形態(tài)存在明顯的差異，表明油菜組織中存在大量內(nèi)生細(xì)菌，且類群豐富。分離獲得的122株內(nèi)生細(xì)菌，根據(jù)菌落形態(tài)可以劃分為35類；利用細(xì)菌通用引物對16S核糖體DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得約1.5kb片段，分別用內(nèi)切酶HaeⅢ和MspⅠ對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切，產(chǎn)生不同的酶切圖譜；根據(jù)酶切圖譜聚類分析結(jié)果，所有供試菌株被歸為39類，這一結(jié)果從遺傳上顯示油菜內(nèi)生細(xì)菌類群的多樣性。兩種

2、方法獲得的歸類結(jié)果經(jīng)過比較，發(fā)現(xiàn)菌落特征所反映的信息量是有限的，只能作為初步的參考指標(biāo)，核糖體DNA的限制性片段長度多態(tài)性分析快速、準(zhǔn)確，可以作為油菜內(nèi)塵細(xì)菌多樣性分析的一種有效方法?！　⊥ㄟ^平板對峙培養(yǎng)法測定122株內(nèi)生細(xì)菌對十字花科黑斑病菌、油菜菌核病菌等10種植物病原真菌的抑菌作用，結(jié)果表明有22株內(nèi)生細(xì)菌對一種以上的病原菌具有抑菌作用，其中5株(G5、BS5、B5、J6、LT20)抑菌譜廣，抑菌作用明顯；進(jìn)一步測定了這5株內(nèi)生

3、細(xì)菌的無菌濾液對10種病原真菌的抑菌率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這5株拮抗菌的發(fā)酵液對病原真菌均有不同程度的抑菌效果。本研究顯示從油菜內(nèi)生細(xì)菌中可篩選到拮抗作用好的菌株，并且內(nèi)生細(xì)菌可產(chǎn)生具有抑菌活性的代謝物，可以作為對多種植物病原真菌具有抑菌活性物質(zhì)的篩選資源。通過16SrDNA序列系統(tǒng)發(fā)育分析，5個菌株分別被鑒定為蠟狀芽孢桿菌、乙酸不動桿菌、成團(tuán)腸桿菌、惡臭假單胞桿菌、成團(tuán)泛菌屬，作為內(nèi)生細(xì)菌存在于油菜體內(nèi)屬首次報道。　　通過16SrDNA序列

4、系統(tǒng)發(fā)育分析對PCR-RFLP劃分的主要類群進(jìn)行了鑒定，共鑒定出內(nèi)生細(xì)菌16種，分別是，分別為：蠟狀芽孢桿菌、泡狀枝動菌、醋酸鈣不動桿菌、鮑氏不動桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、燕麥?zhǔn)乘峋?；菠蘿泛菌、成團(tuán)泛菌、分散泛菌以及泛菌屬的2個未知種、腸桿菌屬的、多食鞘氨醇桿菌、惡臭假單胞菌、黃褐假單胞菌、類黃褐假單胞菌以及假單孢菌屬2個種。這一結(jié)果表明油菜內(nèi)生細(xì)菌的種類非常豐富。它們都是首次在油菜中發(fā)現(xiàn)。其中類黃褐假單胞菌、腸桿菌屬、菠蘿泛菌、分散泛菌、