應用16S rRNA基因序列分析技術鑒定臨床非典型細菌.pdf

1、目的:將16S rRNA基因序列分析技術應用于微生物實驗室傳統(tǒng)方法鑒定可靠率低或無法鑒定的15株實驗細菌，作為細菌常規(guī)鑒定手段的必要補充。
　　 方法:選擇該院臨床微生物實驗室保存的5株標準菌株驗證實驗方法的準確性后，收集實驗室常規(guī)方法不能準確鑒定的實驗細菌15株（涵蓋革蘭陽性球菌，革蘭陽性桿菌及革蘭陰性桿菌），提取DN模板，通用引物PCR擴增16S rRNA基因片段，擴增產(chǎn)物由華大基因測序公司測序，將16S rRNA基因序列與

2、GENBANK數(shù)據(jù)庫中16S rRNA序列進行同源比對分析后，把16S rRNA序列同源性在95％～99％之間定義為同屬細菌，大于等于99％則定義為同種細菌。
　　 結(jié)果:在15株實驗細菌中，有14株菌(93.3％)的16S rRNA基因序列與GENBANK數(shù)據(jù)庫16S rRNA序列同源性達99％以上，成功鑒定到種的水平，包括鼻疽諾卡菌，大腸埃希菌，阿爾萊特葡萄球菌，脆弱擬桿菌，弗氏檸檬酸桿菌，短小芽孢桿菌，河流漫游球菌，極小短