雞毒霉形體的分離鑒定及其16S-23S rRNA基因間隔區(qū)、TM-1基因序列差異分析.pdf

1、雞毒霉形體（Mycoplasma gallisepticum，MG）是雞的慢性呼吸道?。–hronicrespiratory disease，CRD）的病原菌，其特征為呼吸噦音、咳嗽、流漿液性鼻液和氣囊炎。通常與傳染性支氣管炎病毒，新城疫病毒和大腸桿菌等病原協(xié)同感染，導(dǎo)致呼吸道癥狀加劇，使死亡率增高。MG感染在國(guó)內(nèi)禽群中相當(dāng)普遍，感染后雞死亡率一般很低，主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率、孵化率降低，出欄期延長(zhǎng)和飼料利用率降低；對(duì)該病的預(yù)防和控制程序也額

2、外增加了成本，同時(shí)造成禽產(chǎn)品中藥物殘留，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 本研究通過(guò)對(duì)湖北，河南兩地38個(gè)雞場(chǎng)（舍）的162只患呼吸道疾病的雞進(jìn)行霉形體的分離。通過(guò)菌落觀(guān)察及細(xì)菌L型回復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果從10個(gè)雞場(chǎng)（舍）的23只雞中分離純化了77個(gè)霉形體分離物。對(duì)所有霉形體分離物進(jìn)行了菌落形態(tài)觀(guān)察、菌落紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)、生理生化及血清學(xué)鑒定，結(jié)果59個(gè)分離物被鑒定為雞毒霉形體。被鑒定為雞毒霉形體的分離物，在液體培養(yǎng)基中能發(fā)酵葡萄糖，使培養(yǎng)基

3、顏色變黃，在固體培養(yǎng)基表面所形成的菌落呈典型的油煎蛋狀外觀(guān)，大小約50-250μm之間，菌落能吸附0.5％的雞紅細(xì)胞，用抗MG S6株血清以微量法對(duì)77個(gè)分離菌株進(jìn)行了鑒定，結(jié)果有59個(gè)被鑒定為雞毒霉形體，代謝抑制價(jià)在1：80-1：1280之間，且與雞紅細(xì)胞菌落吸附試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果一致。 通過(guò)對(duì)MG分離物16S／23S rRNA基因間隔區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增分析，MG擴(kuò)增片段的大小約890bp，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。利用限制性?xún)?nèi)切酶RsaⅠ對(duì)該片段進(jìn)

4、行限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析，所有MG分離物顯示兩種不同的酶切圖譜，有36個(gè)菌株為790／100型，即片段上有一個(gè)RsaⅠ位點(diǎn)，被酶切為790bp和100bp兩個(gè)片段；有23個(gè)菌株為550／240／100型，片段上有兩個(gè)酶切位點(diǎn)，被切成3個(gè)片段，說(shuō)明雞毒霉形體雖然血清學(xué)上沒(méi)有差異，但在基因型上不同的菌株之間可能存在差異。 從8個(gè)分離到雞毒霉形體的雞場(chǎng)中選各取一個(gè)MG分離株（JX44、HC14、ML21、WS12、XA62、XZA2

5、5、XZC21、YMA22），對(duì)上述菌株的TM-1基因進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序。TM-1基因測(cè)序結(jié)果表現(xiàn)出高度保守性，核苷酸序列同源性在97.1％-99.6％之間，氨基酸同源性在94.6％-99.2％之間。 本研究從湖北省近40個(gè)發(fā)病雞群分離鑒定了眾多MG野外分離株，對(duì)分離株進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定和分子進(jìn)化研究，為今后進(jìn)一步開(kāi)展MG不同分離株的病原性探索、自然弱毒株的篩選、抗原及基因型差異鑒定、基因工程疫苗研制以及雞毒霉形體感染的綜合性防治研究奠