雞毒霉形體的分離鑒定及其16S-23S rRNA基因間隔區(qū)、TM-1基因序列差異分析.pdf

1、雞毒霉形體（Mycoplasma gallisepticum，MG）是雞的慢性呼吸道?。–hronicrespiratory disease，CRD）的病原菌，其特征為呼吸噦音、咳嗽、流漿液性鼻液和氣囊炎。通常與傳染性支氣管炎病毒，新城疫病毒和大腸桿菌等病原協(xié)同感染，導致呼吸道癥狀加劇，使死亡率增高。MG感染在國內(nèi)禽群中相當普遍，感染后雞死亡率一般很低，主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率、孵化率降低，出欄期延長和飼料利用率降低；對該病的預防和控制程序也額

2、外增加了成本，同時造成禽產(chǎn)品中藥物殘留，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。 本研究通過對湖北，河南兩地38個雞場（舍）的162只患呼吸道疾病的雞進行霉形體的分離。通過菌落觀察及細菌L型回復試驗，結果從10個雞場（舍）的23只雞中分離純化了77個霉形體分離物。對所有霉形體分離物進行了菌落形態(tài)觀察、菌落紅細胞吸附試驗、生理生化及血清學鑒定，結果59個分離物被鑒定為雞毒霉形體。被鑒定為雞毒霉形體的分離物，在液體培養(yǎng)基中能發(fā)酵葡萄糖，使培養(yǎng)基

3、顏色變黃，在固體培養(yǎng)基表面所形成的菌落呈典型的油煎蛋狀外觀，大小約50-250μm之間，菌落能吸附0.5％的雞紅細胞，用抗MG S6株血清以微量法對77個分離菌株進行了鑒定，結果有59個被鑒定為雞毒霉形體，代謝抑制價在1：80-1：1280之間，且與雞紅細胞菌落吸附試驗陽性結果一致。 通過對MG分離物16S／23S rRNA基因間隔區(qū)進行擴增分析，MG擴增片段的大小約890bp，與文獻報道一致。利用限制性內(nèi)切酶RsaⅠ對該片段進

4、行限制性片段長度多態(tài)性分析，所有MG分離物顯示兩種不同的酶切圖譜，有36個菌株為790／100型，即片段上有一個RsaⅠ位點，被酶切為790bp和100bp兩個片段；有23個菌株為550／240／100型，片段上有兩個酶切位點，被切成3個片段，說明雞毒霉形體雖然血清學上沒有差異，但在基因型上不同的菌株之間可能存在差異。 從8個分離到雞毒霉形體的雞場中選各取一個MG分離株（JX44、HC14、ML21、WS12、XA62、XZA2

5、5、XZC21、YMA22），對上述菌株的TM-1基因進行擴增并測序。TM-1基因測序結果表現(xiàn)出高度保守性，核苷酸序列同源性在97.1％-99.6％之間，氨基酸同源性在94.6％-99.2％之間。 本研究從湖北省近40個發(fā)病雞群分離鑒定了眾多MG野外分離株，對分離株進行了系統(tǒng)鑒定和分子進化研究，為今后進一步開展MG不同分離株的病原性探索、自然弱毒株的篩選、抗原及基因型差異鑒定、基因工程疫苗研制以及雞毒霉形體感染的綜合性防治研究奠