擴(kuò)增12S rRNA基因鑒定生物檢材種屬.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文擴(kuò)增12S rRNA基因鑒定生物檢材種屬姓名：駱宏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：法醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陸惠玲20070521q 《嬗‘r 山丸肇 中山醫(yī)學(xué)嚏碩士學(xué)位論文物，同時擴(kuò)增各物種1 2 Sr R N A 基因，根據(jù)擴(kuò)增片段的大小差異鑒定種屬。以通用引物擴(kuò)增片段為參照，特異引物擴(kuò)增片段用于種屬鑒定，分別對陳舊血痕、新鮮／冰凍肌肉、高溫處理肌肉、毛干等單一組份檢材和二元混合生物檢材進(jìn)行鑒定；特異引物擴(kuò)增目標(biāo)種屬和非目標(biāo)種屬1

2、 2 Sr R N A 基因以檢測其特異性；目標(biāo)種屬擴(kuò)增產(chǎn)物的測序結(jié)果與G e n B a n k 既有序列比對，根據(jù)其I d e n t i t i e s 分值的高低判斷被檢序列與既有物種序列的一致性程度，從而檢測該法能準(zhǔn)確性；對單一檢材、混合檢材稀釋成不同濃度后擴(kuò)增，檢測本法的靈敏度；用盲測法檢驗本法的實用性。結(jié)果通用引物擴(kuò)增1 1 個物種的1 2 S r R N A 基因，各物種不同類別檢材均有4 0 0 b p 左右的擴(kuò)增片段

3、，其中人3 9 4 b p 、雞4 0 2 b p 、鴨3 9 5 b p 、豬4 0 4 b p 、鵝3 9 2 b p 、綿羊4 0 2 b p 、牛4 0 3 b p 、鼠3 9 9 b p 、兔3 9 8 b p 、山羊4 0 1 b p 、狗3 9 9 1 ：·P ；針對人、雞和鴨的特異引物只對各自目標(biāo)種屬有擴(kuò)增產(chǎn)物，未見交叉擴(kuò)增現(xiàn)象，各目標(biāo)種屬的特異片段大小為：入1 6 3 b p 、雞2 8 6 b p 、鴨3

4、7 4 b p ；目標(biāo)種屬測序結(jié)果與G e n B a n k既有序列比對，I d e n t i t i e s 分值：人1 0 0 ％、雞9 9 ％、鴨1 0 0 ％；靈敏度檢測：目標(biāo)物種的通用引物擴(kuò)增，靈敏度為2 ．5 p g l 特異引物擴(kuò)增人為2 ．5 p g ，雞、鴨均為2 0 0 p g ；對混合檢材研究表明，組份D N A 在混合D N A 中的含量只要高于檢測靈敏度即可被準(zhǔn)確檢出，且不受其他組份干擾；盲測結(jié)果與實際檢材