臺(tái)州地區(qū)耳聾患者12S rRNA和GJB2基因變異的頻譜繪制及遺傳學(xué)分析.pdf

1、目的：
　　 1.繪制浙江省臺(tái)州地區(qū)非綜合征型耳聾患者線(xiàn)粒體12S rRNA和GJB2基因變異頻譜，完善臺(tái)州地區(qū)耳聾患者致病基因和變異位點(diǎn)的數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　 2.進(jìn)一步闡明攜帶線(xiàn)粒體12S rRNAA1555G的耳聾患者可能的高外顯率的發(fā)病機(jī)制。
　　 3.探討GJB2基因各變異類(lèi)型特點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)耳聾表型特點(diǎn)，提供GJB2基因變異分子診斷方法，為GJB2基因診斷提供依據(jù)。
　　 4.初步制定線(xiàn)粒體12S rR

2、NA和GJB2基因耳聾遺傳咨詢(xún)程序、內(nèi)容和方式。
　　 方法：
　　 1.收集臺(tái)州地區(qū)助聽(tīng)器配置耳聾患者、溫嶺市聾啞學(xué)?；純汉蜏貛X市第一人民醫(yī)院耳鼻喉科門(mén)診非綜合征型耳聾患者共173例血樣，并采集患者臨床資料，進(jìn)行統(tǒng)一整理。
　　 2.提取173例耳聾患者的血樣基因組DNA，進(jìn)行線(xiàn)粒體12S rRNA和GJB2基因聚合酶鏈反應(yīng)(polymerise chain reaction，PCR)擴(kuò)增，產(chǎn)物純化后測(cè)序。使用

3、生物軟件如DNAStar和Chromas2.0等將測(cè)序結(jié)果與線(xiàn)粒體和GJB2的標(biāo)準(zhǔn)參考序列進(jìn)行比對(duì)分析，查找線(xiàn)粒體基因組和GJB2變異位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)這兩個(gè)基因患者的變異位點(diǎn)和樣本數(shù)目，并繪制臺(tái)州地區(qū)耳聾患者這兩個(gè)基因的變異頻譜。
　　 3.將篩查到的攜帶線(xiàn)粒體12S rRNAA1555G變異的耳聾患者進(jìn)行線(xiàn)粒體基因組的擴(kuò)增和測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果分析線(xiàn)粒體單體型，結(jié)合臨床資料進(jìn)一步分析單體型對(duì)耳聾表型表達(dá)的影響，以及是否存在其他線(xiàn)粒體上

4、的繼發(fā)突變對(duì)耳聾表型表達(dá)的影響。
　　 4.分析臺(tái)州地區(qū)耳聾患者GJB2基因耳聾相關(guān)致病性變異位點(diǎn)的類(lèi)型特點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)耳聾表型表達(dá)特點(diǎn)。
　　 5.對(duì)篩查到的攜帶線(xiàn)粒體12S rRNA和GJB2基因上耳聾相關(guān)變異位點(diǎn)的耳聾患者進(jìn)行遺傳學(xué)分析，包括遺傳方式及遺傳規(guī)律等，并進(jìn)一步總結(jié)及初步制定遺傳咨詢(xún)的程序和內(nèi)容。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功收集浙江省臺(tái)州地區(qū)助聽(tīng)器配置耳聾患者、溫嶺市聾啞學(xué)?；純汉蜏貛X市第一

5、人民醫(yī)院耳鼻喉科門(mén)診耳聾患者共173例血樣。
　　 2.成功繪制臺(tái)州地區(qū)耳聾患者線(xiàn)粒體12S rRNA和GJB2基因上變異頻譜。
　　 3.173例臺(tái)州地區(qū)的非綜合征型耳聾患者中攜帶線(xiàn)粒體12S rRNAA1555G變異患者有6例，占耳聾患者的3.47％。結(jié)合線(xiàn)粒體全基因組的測(cè)序結(jié)果這6例患者的分別是線(xiàn)粒體東亞單體型A4、B4a2、B5b1、D4b2b2、F1a和F3a，另外，發(fā)現(xiàn)有2例患者除攜帶A1555G變異外分別攜

6、帶線(xiàn)粒體tRNAThr上的T15943C和A15924G變異。
　　 4.173例臺(tái)州地區(qū)的耳聾患GJB2基因上發(fā)現(xiàn)GJB2基因序列改變達(dá)到73.41％;其中致病變異耳聾相關(guān)患者43例，占耳聾患者的24.86％，最常見(jiàn)的235delC變異率達(dá)到21.97％。
　　 5.分析線(xiàn)粒體12S rRNA和GJB2基因耳聾相關(guān)的致病變異位點(diǎn)遺傳特征，并初步制定屬于本實(shí)驗(yàn)室和Attardi線(xiàn)粒體生物醫(yī)學(xué)研究院的主要以這兩個(gè)基因?yàn)橹鞯?/p>

7、耳聾遺傳咨詢(xún)程序、內(nèi)容和方式。
　　 結(jié)論：
　　 1.發(fā)現(xiàn)6例攜帶線(xiàn)粒體12S rRNAA1555G變異患者，占173例臺(tái)州地區(qū)耳聾患者的3.47％。線(xiàn)粒體單體型對(duì)A1555G變異患者的耳聾表型表達(dá)可能影響不大。線(xiàn)粒體tRNAThr上的T15943C和A15924G變異可能是影響線(xiàn)粒體A1555G變異耳聾患者表型表達(dá)的新的繼發(fā)突變位點(diǎn)。
　　 2.臺(tái)州地區(qū)非綜合征型耳聾患者GJB2基因變異占73.41％，致病變