寧波、溫州兩地區(qū)510例非綜合征型耳聾患者GJB2基因突變篩查及全頻譜突變圖譜繪制.pdf

1、耳聾也叫聽力障礙，是指人們感受聲音大小和辨別聲音能力下降的一種表現(xiàn)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，聽力殘疾在五種身體殘疾中比例較高，嚴重影響人們的正常生活。據(jù)介紹，我國是聽力殘疾的高發(fā)國家，根據(jù)2006年第二次全國殘疾人口抽樣調(diào)查顯示，我國聽力殘疾人口約2004萬，占總殘疾人口的24.16％。其中，7歲以下聾兒80余萬，且每年約新生3萬耳聾患兒。國外調(diào)查資料顯示，新生兒聽力障礙的發(fā)生率約為1％至3％，而我國由于地域等不同因素

2、的影響，據(jù)不完全統(tǒng)計約為2％至6％高于國外的報道。耳聾是由遺傳和環(huán)境因素引起的，其中50％的耳聾患者是由遺傳因素造成的。由遺傳因素引起的耳聾包括綜合征型耳聾(syndromic hearing impairment SHI，占30％)和非綜合征型耳聾(nonsyndromic hearing impairment NSHI，占70％)。非綜合征型耳聾可以根據(jù)不同的遺傳方式進一步分為：常染色體隱性遺傳、常染色體顯性遺傳、X-連鎖遺傳和母系

3、遺傳。世界各國學者對本國耳聾患者進行大規(guī)模的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，其中以常染色體隱性遺傳最為常見，占75％～80％，且癥狀嚴重。據(jù)估計約有100多種基因與NSHI有關，每年都有導致NSHI的基因被克隆，其中編碼連接蛋白26(Cx26)的GJB2基因位于人染色體13q11-q12上，編碼區(qū)為681bp。GJB2基因突變在導致語前性遺傳性非綜合征性耳聾方面有著重要的意義，研究發(fā)現(xiàn)：50％的白種人常染色體隱性遺傳性NSHI與GJB2基因突變有關，即使

4、是散發(fā)病例該基因突變也達10％～37％。目前常染色體隱性遺傳性NSHI中，GJB2基因的突變方式有100多種，約占遺傳性耳聾的20％，因此對GJB2基因的突變進行篩查及研究，對耳聾的診斷、治療、預后，尤其是預防有著重要的意義，其次為控制耳聾的發(fā)生及流行病學研究提供依據(jù)和手段，對改善人類健康素質(zhì)做出貢獻。目前，已有研究人員在全國范圍內(nèi)進行研究調(diào)查，但這些研究主要著重與GJB2基因突變的頻率及235delC突變的檢測率的研究，尚未對寧波、溫

5、州兩地區(qū)GJB2基因突變進行完整的研究且國內(nèi)外尚未GJB2基因致病突變復合雜合形式致聾的報道。所以本研究針對寧波、溫州兩地區(qū)非綜合征型耳聾患者，收集大量的非綜合征型耳聾患者的資料，進行GJB2基因的分子流行病學研究及GJB2基因復合雜合致病突變與非綜合癥型耳聾相關性研究，研究工作包括以下三個方面： 第一部分非綜合征型耳聾患者臨床資料的收集和GJB2基因235delC突變的篩查 目前發(fā)現(xiàn)的非綜合征型常染色體隱性遺傳性耳聾相

6、關基因已有40余個，而其中約50％的NSHI患者是GJB2基因突變導致。本研究共收集寧波、溫州兩地區(qū)聾啞學校、聾兒康復中心及溫州醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院耳鼻喉科，余姚人民醫(yī)院的NSHI患者標本共510份，在標本收集的同時進行詳細的臨床資料收集。研究發(fā)現(xiàn)GJB2基因235delC突變?yōu)閷幉ā刂輧傻厝巳旱耐蛔儫狳c，突變率達到16.47％。此研究對NSHI患者進行大規(guī)模的突變篩查及遺傳咨詢有著重要的意義。 第二部分非綜合征型耳聾患者GJB

7、2基因突變頻譜繪制 1994年，第一個與耳聾的有關的常染色體隱性遺傳(DNFB)的基因被定位于13q11。研究發(fā)現(xiàn)100多種基因與耳聾有關，近來一些基因已經(jīng)得到克隆鑒定。近幾年來，隨著分子生物學和分子遺傳學的迅猛發(fā)展、人類基因組計劃的實施和完成及生物信息學這一新興學科的出現(xiàn)，遺傳性耳聾的分子病因學研究取得了飛速的發(fā)展。目前已報道GJB2基因突變包括錯義突變、無義突變、移碼突變、插入及缺失等突變類型共一百多種。 本研究對寧

8、波、溫州兩地區(qū)NSHI患者510份標本進行GJB2基因的全序列檢測，發(fā)現(xiàn)GJB2基因序列改變達到76.27％；其中致病突變率為19.80％，最常見的235delC突變達到16.47％。本研究中共發(fā)現(xiàn)GJB2序列改變14種，其中4種為GJB2基因新位點變異方式，對其基因型與耳聾表型之間的關系進行分析。明確了寧波、溫州兩地區(qū)GJB2基因突變發(fā)生頻率，繪制了寧波、溫州兩地區(qū)NSHI人群GJB2基因的突變圖譜，并建立快速分子診斷方法，為聾病的分

9、子診斷提供可靠的方法和依據(jù)，為寧波、溫州兩地區(qū)的聾病產(chǎn)前診斷、遺傳篩查和遺傳咨詢提供實驗證據(jù)，為在寧波、溫州兩地區(qū)范圍內(nèi)開展耳聾疾病的基因診斷提供流行病學數(shù)據(jù)。 第三部分攜帶GJB2基因致病突變的八個中國漢族耳聾家系的遺傳特點分析 NSHI患者中約50％是由于GJB2基因突變引起的。在這里我們報道八個攜帶GJB2基因致病突變的中國漢族家系，先證者的臨床表現(xiàn)都為雙側，重度至極重度耳聾，及聽力曲線呈現(xiàn)多樣性。GJB2基因突

10、變分析時發(fā)現(xiàn)：先證者分別攜帶有235delC+/+、176del166bp+/-/235delC+/-、176del16bp+/-/299delAT+/-、235delC+/-/299delAT+/-、及235delC+/-/512insAACG+/-致病突變，而其父母卻僅有一個相應位點的雜合突變。我們對這八個家系進行分析，確定其基因型與表型之間的關系，分析其遺傳特征。為攜帶有致病突變的家庭提供產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的理論依據(jù)，避免家庭再次