中國(guó)北方一馬凡綜合征家系致病基因突變篩查.pdf

1、研究背景：馬凡綜合征(MFS)是一種常染色體顯性遺傳的結(jié)締組織病，患病率約為1/5000～10000，主要累及眼，骨骼和心血管三大系統(tǒng)，在眼部的主要表現(xiàn)為高度近視，眼軸過(guò)長(zhǎng)，扁平角膜以及晶體脫位：其在心血管系統(tǒng)中的主要表現(xiàn)為二尖瓣脫垂，主動(dòng)脈根部擴(kuò)張，而主動(dòng)脈瘤和動(dòng)脈夾層是馬凡綜合征患者致死的主要原因。 馬凡綜合征為一不規(guī)則顯性遺傳病，其發(fā)病主要是由于編碼原纖維蛋白1的原纖維蛋白1基因(FBN1)突變所致，在不同的家系甚至同一家

2、系的不同患者中，其發(fā)病年齡，受累器官以及臨床表型的嚴(yán)重程度都會(huì)存在明顯的不同。以往診斷馬凡綜合征主要的根據(jù)受累患者的臨床表現(xiàn)符合其臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，但在許多幼年的MFS患者，其臨床表型還沒(méi)有充分顯現(xiàn)，因此，在分子水平上開(kāi)展基因篩查可以早期發(fā)現(xiàn)患者，進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪并有助于早期開(kāi)展心血管并發(fā)癥的預(yù)防治療。同時(shí)，在同一家系的不同患者之間可能存在臨床表型的差異，尋找致病基因突變可以幫助確診患病個(gè)體。盡管目前對(duì)MFS基因型和表型的關(guān)系還不是清楚，對(duì)于攜

3、帶FBNl基因突變的個(gè)體還不能預(yù)測(cè)其臨床表型的嚴(yán)重程度，但是確為開(kāi)展產(chǎn)前診斷提供了可能。 目的：確定中國(guó)北方常染色體顯性遺傳性馬凡綜合征(MFS)一家系的致病基因突變。 方法： 1、收集MFS一家系資料，對(duì)其進(jìn)行臨床研究和系譜分析，在知情同意的前提下采集家系中3例患者和3例健康成員的靜脈血，經(jīng)典酚氯仿法提取基因組DNA。 2、應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增馬凡綜合征致病候選基因原纖維蛋白1(FBN1)基因

4、所有外顯子及外顯子-內(nèi)含子接頭處，直接測(cè)序確定致病的基因突變。 3、將所得基因序列首先與GENEBANK進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)同該家系患者共分離的基因突變后，首先對(duì)該突變進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性分析(SNP)，以排除該突變是否為已知正常多態(tài)位點(diǎn)。其次，查詢國(guó)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，以排除是否為已報(bào)道突變。最后，如果確定為新發(fā)現(xiàn)的突變，尚需對(duì)至少50個(gè)(100條染色體)無(wú)血緣關(guān)系的正常人進(jìn)行該位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增、測(cè)序，以排除所發(fā)現(xiàn)的突變?yōu)槲粗后w多態(tài)性的

5、可能。 結(jié)果：在該家系患者FBN1基因外顯子6發(fā)現(xiàn)了錯(cuò)義突變，CDNA640位的鳥(niǎo)嘌呤G被腺嘌呤A取代(G640A)，對(duì)應(yīng)的甘氨酸變?yōu)榻z氨酸。突變后Eag I內(nèi)切酶位點(diǎn)消失，該突變?cè)诩蚁抵斜憩F(xiàn)為與疾病共分離。G640A為再發(fā)突變，以往在一中國(guó)單純晶體脫位家系中已有報(bào)道，已證實(shí)其為致病性突變，這在典型的MFS家系中首次報(bào)道G640A的突變。而對(duì)FBN1基因其余65個(gè)外顯子的篩查并未發(fā)現(xiàn)突變。 結(jié)論：FBN1外顯子6基因突變