中國北方骨髓衰竭綜合征端粒酶基因突變和端粒長度變化的研究.pdf

1、背景：骨髓衰竭綜合征(Bone marrow failure syndrome)包括一組疾病，可以是先天的或獲得的。先天性骨髓衰竭綜合征包括Fanconi貧血、先天性角化不良(DKC)、Shwachman-Diamond綜合征等。最常見的獲得性骨髓衰竭綜合征是再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠血紅蛋白尿癥(PNH)和骨髓增生異常綜合征(MDS)。以獲得性再生障礙貧血(以下簡稱再障)為例，東方人群該病的發(fā)病率是西方的2到3倍。造成這種東西方發(fā)病率

2、差異的原因目前還不明確，推測可能與種族間的再障相關基因背景不同有關。關于骨髓衰竭綜合征可能與端粒酶缺陷有關的想法，最早始于對先天性角化不良(Dyskeratosis Congenita，DKC)的研究。在部分常染色體顯性遺傳的DKC患者中，發(fā)現(xiàn)端粒酶RNA模版TERC基因3'端存在缺失突變，提示這些病人骨髓衰竭的原因可能與端粒酶基因缺陷有關。進而在部分獲得性再障的病人中也發(fā)現(xiàn)了TERC基因突變，但是這部分患者并沒有典型的DKC的皮膚表現(xiàn)

3、。以此為出發(fā)點，近幾年國外學者在獲得性再障、MDS以及PNH患者中對端粒酶復合體基因突變做了相關的篩查，發(fā)現(xiàn)獲得性再障患者中的一小部分存在端粒酶復合體基因的突變，包括TERC(telomerase RNA component)和TERT(telomerase reversetranscriptase)基因突變。但是亞洲人群中，目前只有日本在96例兒童再障患者中篩查了上述兩個基因突變。為了進一步研究亞洲人群骨髓衰竭高發(fā)是否與端粒酶基因突變

4、有關，本研究收集了中國北方獲得性骨髓衰竭綜合征患者90例(包括獲得性再障、MDS和PNH)，對端粒酶基因突變進行了篩查。并用Southern雜交和流式一原位雜交兩種方法測定了患者端粒長度，研究端粒酶基因突變對端粒長度造成的影響，以及骨髓衰竭患者不同白細胞亞群間端粒縮短的差異。研究的意義在于，通過這種篩查，可以使我們發(fā)現(xiàn)一些臨床表現(xiàn)與獲得性骨髓衰竭難以區(qū)分的病人，他們治療上宜早期進行骨髓移植而非免疫抑制。 目的：1.研究中國北方人

5、群骨髓衰竭綜合征患者端粒酶復合體基因突變發(fā)生的頻率，以及突變與端粒長短的關系。 2.Southern blot方法測量患者端粒長度，研究端粒酶基因突變與端粒長度變化間的關系。 3.建立流式雜交方法檢測不同有核細胞端粒長度的變化。 方法： 1.收集北京協(xié)和醫(yī)院、河北廊坊市中醫(yī)院、北京市朝陽醫(yī)院，以及北京市東直門醫(yī)院部分診斷明確的骨髓衰竭綜合征患者90人(包括再生障礙性貧血、骨髓增生異常綜合征、陣發(fā)性血紅蛋白

6、尿)。疾病診斷標準參見張之南等人主編的《血液病學》2。 2.提取患者外周血DNA。PCR方法擴增TERC基因及TERT基因第一、二外顯子，雙脫氧核酸終止法測序。 3.Southern雜交方法測定患者端粒長度。 4.流式-原位雜交方法測定外周血不同白細胞亞群端粒長度。 結(jié)果：90例患者中發(fā)現(xiàn)兩例TERC基因突變和兩例TERT突變。TERC突變：(1)n37 A→G；(2)n66G→C。TERT基因突變(1)

7、n1870G→T，造成氨基酸缺失：E/*；(2)n1780G→T，造成氨基酸替換S/I。其中一例TERT突變患者最終診斷為先天性角化不良(DKC)，而非獲得性骨髓衰竭綜合征。則最終確診獲得性骨髓衰竭綜合征患者共89人，發(fā)現(xiàn)3例突變。中國北方人群中端粒酶基因突變發(fā)生率為3.4％。用Southern雜交表明，上述兩例攜帶端粒酶基因突變的病人端粒嚴重縮短，小于正常對照長度的50％。Southern雜交顯示部分無突變的骨髓衰竭患者端粒也有縮短，

8、位于正常對照長度的50-80％，與部分惡性血液病如MDS-RAEB患者的端粒長度重疊，提示惡性轉(zhuǎn)化可能。Flow-FISH也證實，部分獲得性骨髓衰竭患者外周血單個核細胞端粒長度較正常人縮短，并且單個核細胞與粒細胞端?？s短程度間存在差異。 結(jié)論： 1.在中國北方人群中，獲得性骨髓衰竭綜合征患者端粒酶復合體基因突變發(fā)生率約為3.4％，與西方人群發(fā)生率相似，說明中國人群該病高發(fā)的原因與端粒酶基因關系不大。 2.Sout