絨山羊端粒酶組分基因的序列克隆及其表達(dá)與端粒酶活性的相關(guān)性研究.pdf

1、真核生物體內(nèi)的端粒酶(Telomerase)是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，能夠特異地延長(zhǎng)端粒DNA長(zhǎng)度，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂與增殖，端粒酶主要包括RNA組分(Telomerase RNA Component，TERC)和逆轉(zhuǎn)錄酶組分(Telomerase ReverseTranscriptase，TERT)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)絨山羊端粒酶的這兩種組分的基因序列進(jìn)行了克隆和測(cè)序，并對(duì)這兩種組分在成年絨山羊不同組織中的表達(dá)情況及端粒酶活性狀態(tài)進(jìn)行研究。首先，分別分析

2、和比對(duì)了牛、人、小鼠和大鼠中TERC和TERT的序列，根據(jù)序列同源性設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，并利用絨山羊基因組DNA和cDNA作為模板，通過PCR擴(kuò)增得到TERC組分474bp的基因序列與289bp的cDNA序列，以及TERT基因4842bp的基因序列和2712bp的cDNA部分序列，將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pGEM-T easy載體中進(jìn)行測(cè)序，將所得的序列信息利用NCBI網(wǎng)站的BLAST軟件進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明，絨山羊相應(yīng)組分的序列與牛的序列同源性高達(dá)9

3、4％以上，并且與人、小鼠、大鼠的序列相比序歹0的同源性同樣很高。 在此基礎(chǔ)上，利用RT-PCR技術(shù)對(duì)絨山羊端粒酶這兩種組分在心臟、腎臟、肝臟、睪丸組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示：TERC基因在以上四種組織中均有表達(dá)，而TERT基因則僅在腎臟和睪丸中有表達(dá)，且睪丸中的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于腎臟，而在心臟和肝臟中未檢測(cè)到。同時(shí)，通過端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法(Telomeric Repeat Amplification Protoco