人端粒酶催化亞單位基因的表達(dá)及其多克隆抗體的制備.pdf

1、　　人端粒酶催化亞單位是人端粒酶各組分中唯一在腫瘤組織中表達(dá)而在正常組織中不表達(dá)的亞基。鑒于端粒酶的激活和腫瘤密切相關(guān)，而hTERT基因的表達(dá)又是端粒酶激活系列反應(yīng)中的限速步驟，因此hTERT基因的表達(dá)可以作為腫瘤的平行標(biāo)志而應(yīng)用于腫瘤的檢測和診斷?！　”疚慕柚肿由飳W(xué)軟件列出hTERT上9mer肽段與HLA-A2.1分子分離的半數(shù)時(shí)間，該時(shí)間越長則意味著該肽段在抗原、HLA和細(xì)胞毒性T細(xì)胞三者的相互作用中意義越大。據(jù)此選取了半數(shù)時(shí)

2、間最長的540ILAKFLHWL548、555ELLRSFFYV5632個(gè)肽段作為主要腫瘤相關(guān)抗原。通過PCR擴(kuò)增了含有以上肽段編碼序列的一段hTERT基因，嘗試在畢赤酵母和大腸桿菌中進(jìn)行重組表達(dá)，并在大腸桿菌中獲得了成功表達(dá)。在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中，將hTERT基因克隆至表達(dá)載體pGEX-4T-1中，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-hTERT，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)菌株中，并篩選出穩(wěn)定表達(dá)的工程菌。超聲后SDS-PAGE分析，表達(dá)