馬凡綜合征FBN1和TGFBR2基因突變研究.pdf

1、目的：對14例馬凡綜合征(Marfansyndrome，MFS)患者的原纖蛋白一1(fibrillin．1，F(xiàn)BNl)基因和轉(zhuǎn)化生長因子-B受體2(TransformingGrowthFactorBetaReceptorTypeII，TGFBR2)基因進行基因突變篩查，以明確這些MFS患者FBNl和TGFBR2基因突變的情況，并觀察基因突變與臨床表型之間的關(guān)系。方法：應(yīng)用PCR分別擴增14例MFS患者FBNl基因的65個外顯子和其中¨例

2、MFS患者(未發(fā)現(xiàn)FBNl基因突變)TGFBR2基因的7個外顯子。然后應(yīng)用變性高效液相色譜(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)一異源雙鏈分析(heteroduplexanalysis)對這些外顯子的擴增片段進行基因突變篩查，最后對疑有突變的PCR擴增片段進行DNA測序，以明確突變位點及類型。結(jié)果：(1)14號MFS患者FBNl的64號外顯子的DHPLC圖譜異常，測序

3、證實其FBNl的64號外顯子的第8080個堿基置換(8080C>T)，造成無義突變，使其第2694個核苷酸(精氨酸)的密碼子CGA變?yōu)榻K止密碼子TGA，導(dǎo)致缺失176個氨基酸。該無義突變用限制性片段長度多態(tài)性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RELP)分析得到了進一步的證實。 (2)¨號MFS患者FBNl的29號外顯子的DHPLC圖譜異常，測序證實其FBNl的29號內(nèi)含子的+4堿基置換

4、(Intron29，+4A>T)。該突變用RELP分析得到了進一步的證實。該單核苷酸多態(tài)性十分靠近Intron29和Exon29的剪接位置，與FBNl基因中Exon29的選擇性剪接關(guān)系有待于進一步研究。 (3)2號MFS患者FBNl的7號外顯子的DHPLC圖譜異常，測序證實其FBNl的7號內(nèi)含子的-37堿基缺失(Intron7．．37delT)。 (4)12號MFS患者的FBNl的56號外顯子的DHPLC圖譜異常，測序證

5、實其FBNl的56號外顯子的第6888個堿基置換(6888G>A)，使其第2296個核苷酸(谷氨酰胺)的密碼子CAG變?yōu)镃AA，屬于同義突變。 (5)4、5、6、7、8、9號MFS患者的TGFBR2的4號外顯子的DHPLC圖譜異常，測序證實其TGFBR2的4號外顯子的第1245個堿基置換(1245C>T)，使其第389個核苷酸(天冬酰胺)的密碼子AAC變?yōu)锳AU，屬于同義突變。結(jié)論：(1)FBNl基因64號外顯子(8080C>T

6、)的無義突變是MFS患者致病原因之一。 (2)FBNl基因29號內(nèi)含子+4T>A的單核苷酸多態(tài)性可能是MFS患者致病原因。FBNl基因7號內(nèi)含子-37delT、56號外顯子6888G>A，和TGFBR2基因4號外顯子1245C>T的單核苷酸多態(tài)性可能不是MFS患者主要的致病原因。 (3)DHPLC是一種高效、簡便、經(jīng)濟可靠的基因突變篩選方法，適用于大規(guī)模的基因突變篩查。 (4)FBNl和TGFBR2基因突變篩查從