家蠶腸球菌16S rDNA序列及生化特性分析.pdf

1、從家蠶消化道分離得到5株腸球菌(C1、GC、FD、A20、F1-4)，其中F1-4對家蠶微孢子蟲(Nosemabombycis，簡稱N.b)體外發(fā)芽有抑制作用。本文研究了這5株分離菌株的生理生化特征和16SrDNA序列，并與腸球菌種特異性探針序列進行了比對。以期為進一步研究家蠶腸球菌的多樣性及家蠶微粒子病的生物防治奠定基礎。 CTAB法抽提基因組DNA，采用腸球菌通用引物擴增16SrDNA，并進行序列測定。將測序結果用BLAST

2、軟件與GenBank中的相關屬種的16SrDNA序列進行比較。從GenBank中調取腸球菌屬(Enterococcus)32個菌株的16SrDNA序列用于系統(tǒng)發(fā)育學分析。16SrDNA全序列用Clustalx(1.8)軟件包排序，選擇大腸桿菌(Escherichiacoli)為外群，用MEGAversion2軟件包中的Kuimura2-ParameterDistance模型計算進化距離，用Neighber-Joining法構建系統(tǒng)發(fā)育樹

3、，1000次隨機抽樣，計算自引導值(Bootstrap)以評估系統(tǒng)發(fā)育樹的置信度。由16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育分析結果可知，分離菌株與蒙氏腸球菌(EnterococcusmundtiiAJ301836)有高同源性，在系統(tǒng)發(fā)育樹中聚為一群。比較分離菌株16SrDNA序列和腸球菌種特異性探針序列，C1、F1-4、FD、GC、A20含有與蒙氏腸球菌種特異性探針完全相同的序列，與其它腸球菌探針均不完全相同。生理生化特征測定結果表明，除A20外，分離