宮頸癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及相關(guān)蛋白的鑒定和表達(dá).pdf

1、研究目的 一. 尋找宮頸癌和對(duì)照組之間的蛋白差異，發(fā)現(xiàn)蛋白標(biāo)志物或癌相關(guān)蛋白； 二. 分離純化富集目的蛋白，并以質(zhì)譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定； 三. 鑒定的差異蛋白在宮頸癌血清及組織中表達(dá)的探討。 材料和方法 一. 以SELDI-TOF-MS分析宮頸癌患者和對(duì)照組血清的蛋白質(zhì)或肽的表達(dá)得到差異蛋白； 二. 離子交換層析、SDS-PAGE方法進(jìn)一步分離純化差異的目標(biāo)蛋白，SELDI-TOF-MS在每

2、步分離純化過(guò)程中進(jìn)行驗(yàn)證目標(biāo)蛋白的存在，最后以ESI-LC-MS/MS對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定； 三. 以ELISA、Westen Blot 及免疫熒光方法驗(yàn)證鑒定出的蛋白在宮頸癌患者血清及組織中的表達(dá)； 四. 以MALDI-TOF-MS技術(shù)初步分析宮頸癌組織和正常宮頸的差異蛋白。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一. 血清蛋白的表達(dá)差異宮頸癌患者和對(duì)照組血清問(wèn)差異蛋白(P<0.05)12個(gè)，宮頸癌組血清又以分化程度、肌層浸潤(rùn)深

3、度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、臨床分期進(jìn)行分組，組內(nèi)分析，得到各情況下的差異蛋白。 二. 目的蛋白鑒定結(jié)果我們分離純化并鑒定了M/Z 15960Da的目的蛋白，比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定出8類(lèi)蛋白，其中有血清高峰度蛋白。從蛋白的生物學(xué)行為上最讓我們感興趣的是轉(zhuǎn)錄中介因子TIF1-β，也叫做KAP-1/1

4、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TTR)，也有少數(shù)研究表明它的某些修飾形式與腫瘤有關(guān)。 三. TIF1-β在宮頸癌血清及組織中的表達(dá)情況在宮頸癌及正常宮頸組織中免疫熒光和WB都檢測(cè)到TIF1-β表達(dá)，且WB顯示宮頸癌組織中有特異性條帶出現(xiàn)，可能和腫瘤有關(guān)。TIF1-β在宮頸癌及對(duì)照組患者血清中用ELISA方法(檢出下限1ng/ml)未能檢測(cè)到。 四．宮頸癌組織及正常宮頸組織蛋白質(zhì)譜以MALDI-TFOF-MS技術(shù)對(duì)兩組組織切片進(jìn)行蛋白質(zhì)譜檢測(cè)

5、分析，軟件分析出28個(gè)P<0.05的蛋白峰，手動(dòng)分析出一個(gè)分子量為33305Da-33327Da的蛋白峰。 結(jié)論 1、 SELDI-TOF-MS檢測(cè)了宮頸癌患者與對(duì)照組血清中的差異蛋白，是靈敏、可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)方法。 2、我們?cè)趪?guó)內(nèi)首次采用SELDI-TOF-MS尋找差異蛋白，SELDI-TOF-MS輔助進(jìn)行蛋白分離純化，LC-ESI-MS/MS鑒定蛋白的技術(shù)路線。 3、對(duì)M/Z15960Da的差異蛋白分離純