宮頸癌新輔助化療相關(guān)蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、目的:利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法研究6例宮頸癌組織新輔助化療前后的蛋白表達圖譜的改變,并對宮頸癌組織新輔助化療前后差異表達的蛋白進行篩選、鑒定及驗證。以期望得到與宮頸癌化療敏感/耐藥相關(guān)蛋白,從而在化療前預(yù)測腫瘤對化療藥物的敏感性,使患者得到更加有效的個體化治療。
　　 方法:選取2007年～2008年在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院行新輔助動脈化療(有效)后手術(shù)的巨塊型Ⅰ b～Ⅱa期宮頸鱗癌6例,收集其化療前宮頸活檢組織及手術(shù)新鮮標(biāo)本保存于

2、-80℃?zhèn)溆?所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)診斷為宮頸鱗癌。取患者化療前后標(biāo)本提取總蛋白,采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)得到化療前后凝膠圖譜。用ImageMaster5.0分析軟件對電泳結(jié)果進行數(shù)據(jù)采集和圖像分析,發(fā)現(xiàn)化療前后差異表達的蛋白點；用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(MALDT-TOF-MS)質(zhì)譜儀進行分析,數(shù)據(jù)庫檢索識別差異表達的蛋白點；選取差異蛋白質(zhì)點,膠內(nèi)酶解后行肽指紋圖分析及網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫鑒定,鑒定差異蛋白質(zhì)。然后采用Weste

3、rn Blot和免疫組織化學(xué)方法(10例)進一步驗證差異表達的蛋白Peroxiredoxin1和Galectin-1。
　　 結(jié)果:建立了宮頸鱗癌化療前后蛋白差異表達的雙向凝膠電泳圖譜,發(fā)現(xiàn)化療前后存在3倍以上量差表達的蛋白點共有116個(P<0.05),其中31個差異蛋白點通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定,包括化療后表達上調(diào)的蛋白點有15個,表達下調(diào)的蛋白點有16個。同時,我們發(fā)現(xiàn)大部分蛋白與腫瘤發(fā)生及化療敏感/耐藥

4、相關(guān)。
　　 采用Western Blot和免疫組織化學(xué)的方法分析Peroxiredoxin1和Galectin-1這兩個蛋白,發(fā)現(xiàn):Peroxiredoxin1蛋白在化療后癌組織的表達顯著高于相應(yīng)化療前癌組織,而Galectin-1在化療后癌組織中的表達顯著低于相應(yīng)化療前癌組織。
　　 結(jié)論:
　　 1.運用雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法可以簡單有效的分離出宮頸癌組織化療前后差異表達的蛋白質(zhì),結(jié)果可信；