IgA腎病組織蛋白質(zhì)組和尿液蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、背景和目的：IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)是目前世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，是引起終末期腎衰竭的重要原因之一，30％～40％的IgAN患者在診斷該病后20年內(nèi)發(fā)展成終末期腎病(end stage renal disease，ESRD)，給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。IgAN的確診目前仍依賴于腎活檢，但腎穿刺活檢為有創(chuàng)性檢查，存在一定風(fēng)險(xiǎn)和禁忌證。IgAN起病隱匿，易導(dǎo)致診治不及時(shí)，因此早期篩查、診治對(duì)于防

2、控，減少ESRD患者數(shù)量尤為重要。因此，探尋IgAN的發(fā)病機(jī)制和早期無(wú)創(chuàng)生物標(biāo)志物具有重要意義。本研究采用Raybiotech細(xì)胞因子抗體芯片技術(shù)對(duì)IgAN患者和對(duì)照組腎臟組織進(jìn)行檢測(cè);采用高分辨質(zhì)譜技術(shù)對(duì)IgAN患者、原發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)患者和正常人群尿液進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)分析;篩選IgAN的生物標(biāo)志物，探討其應(yīng)用價(jià)值，進(jìn)一步闡明IgAN的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：(

3、1)入選年齡18～60歲，解放軍總醫(yī)院住院腎活檢確診為IgAN的患者10例，取活檢腎組織進(jìn)行研究;年齡18～60歲的于解放軍總醫(yī)院泌尿外科行腎癌腎臟切除的患者10例，取腎癌患者癌旁6cm以外的正常腎臟組織作為對(duì)照組進(jìn)行研究。收集上述人群的臨床基本信息及化驗(yàn)檢查結(jié)果。上述人群腎臟組織利用Raybiotech細(xì)胞因子抗體芯片進(jìn)行檢測(cè)，篩選差異蛋白質(zhì)，并對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行GO(Gene Ontology)分析。結(jié)合分析結(jié)果，選取了IL-33利用

4、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　(2)對(duì)解放軍總醫(yī)院腎科腎穿刺活檢患者進(jìn)行篩選，入組20-60歲的48例診斷為IgANⅡ～Ⅲ級(jí)的患者和9例診斷為IMNⅠ～Ⅱ期的患者;另入組40例20-60歲尿常規(guī)、血常規(guī)及血生化結(jié)果無(wú)明顯異常且無(wú)基礎(chǔ)疾病的正常人作為健康對(duì)照。收集上述人群晨起第1次尿中段尿，通過(guò)Lable free LC/MS高分辨質(zhì)譜技術(shù)對(duì)29例IgAN患者9例IMN患者和40例健康對(duì)照進(jìn)行尿液蛋白質(zhì)檢測(cè)，篩選差異

5、蛋白質(zhì)，對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行GO富集分析;依據(jù)蛋白質(zhì)譜和數(shù)據(jù)分析的結(jié)果，結(jié)合IgAN可能的發(fā)病機(jī)制，選取48例IgAN患者和40例正常人尿液利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin，TF)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：(1)對(duì)10例病理診斷為IgANⅡ～Ⅲ級(jí)、10例正常腎臟組織進(jìn)行細(xì)胞因子表達(dá)譜檢測(cè)，共發(fā)現(xiàn)了25個(gè)差異蛋白質(zhì)，GO分析結(jié)果表明：這些蛋白質(zhì)主要與應(yīng)激、細(xì)胞粘附、蛋白質(zhì)代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。ELISA驗(yàn)證

6、結(jié)果顯示：IgAN患者腎組織中IL33表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。
　　(2)利用高分辨質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比對(duì)，在IgAN和IMN疾病組，檢測(cè)到53種蛋白質(zhì)差異表達(dá)(p＜0.05);在IMN組中找到15種顯著差異表達(dá)但在IgAN組中無(wú)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)(p＜0.05);在IgAN組中找到13種差異表達(dá)但在IMN組中無(wú)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)(p＜0.05)。IMN組和IgAN組組間，找到了9種蛋白質(zhì)差異表達(dá)(p＜0.05)。GO富

7、集發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白質(zhì)主要參與凝血與血栓形成、炎癥反應(yīng)、補(bǔ)體系統(tǒng)激活、蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)、鐵代謝、糖及脂質(zhì)代謝生物過(guò)程。差異蛋白C3、EGF、APOD等與以往研究結(jié)果相符，ORM1、ORM2可能是診斷IgAN和IMN的生物標(biāo)志物。ELISA驗(yàn)證結(jié)果顯示：IgAN患者尿液中TF表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，TF具有非常大的診斷價(jià)值。
　　結(jié)論：IL-33可能是IgAN發(fā)病機(jī)制中起重要作用的細(xì)胞因子，TF可能是優(yōu)于24h尿蛋白定量診斷IgAN和IM