子宮內(nèi)膜異位癥比較蛋白質(zhì)組學研究及相關(guān)蛋白的鑒定與表達.pdf

1、研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥(內(nèi)異癥)是生育年齡婦女的多發(fā)病、常見病，發(fā)病率呈明顯上升趨勢，可達15％～20％，占普通婦科手術(shù)的30％以上。內(nèi)異癥所引起的痛經(jīng)、下腹痛和性交痛等，嚴重地影響婦女的健康和生活質(zhì)量，也是不育癥的主要病因之一。內(nèi)異癥病變廣泛、形態(tài)多樣，極具侵襲和復發(fā)性，對臟器結(jié)構(gòu)和功能的破壞與惡性腫瘤相當。但其發(fā)病機制目前尚不清楚，亦缺乏有效的臨床診斷和治療方法，缺乏特異性的生物學標志物。蛋白質(zhì)組學技術(shù)作為生命科學里的前沿技術(shù)，具

2、有敏感、準確、高通量、快速的優(yōu)點，為內(nèi)異癥的研究提供了強有力的工具。利用蛋白質(zhì)組學技術(shù)篩選內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜和血清中差異表達的蛋白質(zhì)，不僅有助于了解子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制，發(fā)現(xiàn)可以反映細胞的病理改變、與疾病發(fā)生發(fā)展有關(guān)的分子標志物，同時也為內(nèi)異癥的診斷和導向治療打下基礎(chǔ)。 研究目的 對前期實驗中篩選的內(nèi)異癥與和子宮腺肌癥中異常表達的蛋白質(zhì)進行驗證；建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)表達譜，并對相關(guān)的差異蛋白進行驗證；建立內(nèi)異癥血

3、清蛋白質(zhì)指紋診斷及與卵巢癌的鑒別診斷模型，篩選差異蛋白質(zhì)峰；以期探討內(nèi)異癥的發(fā)病機制，尋找可以用于內(nèi)異癥診斷的血清學標志物。 研究方法 1、應用Real-TimePCR、WesternBlot和免疫組化比較內(nèi)異癥與非內(nèi)異癥婦女在位內(nèi)膜中stathmin和Annexin-1的表達。 2、應用雙向電泳結(jié)合MALDI-TOF-MS與生物信息學技術(shù)，篩選內(nèi)異癥患者血清中差異表達的蛋白質(zhì)，WesternBlot和免疫組化對

4、差異蛋白進行驗證。 3、應用SELDI-TOF-MS技術(shù)建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)指紋圖譜，建立內(nèi)異癥診斷及其與卵巢癌、卵巢良性腫瘤的鑒別診斷模型。 結(jié)果 1、stathmin和Annexin-1在內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜中均有高表達。 2、成功建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)譜，鑒定出12個差異蛋白質(zhì)，與細胞骨架、細胞活動及能量代謝有關(guān)。 3、WesternBlot和免疫組化對血清差異蛋白CK1進行驗證，結(jié)果

5、顯示內(nèi)異癥患者血清中CK1表達升高。 4、成功建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)指紋圖譜，篩選出26個差異蛋白質(zhì)峰。 5、以M/Z為5632Da、8135Da兩個蛋白質(zhì)建立的診斷模型對內(nèi)異癥的診斷有較高的敏感性和特異性；血清中M/Z為5632Da的蛋白對內(nèi)異癥與卵巢癌的鑒別診斷有較高的敏感性和特異性。 結(jié)論 1、stathmin和Annexin-1都是有重要功能的調(diào)控蛋白。本研究證明兩者在內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜中均有

6、高表達，提示其可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生，再次表明在位內(nèi)膜在內(nèi)異癥發(fā)生過程中的重要作用。 2、應用雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥與非內(nèi)異癥婦女血清中存在差異蛋白，其中與細胞骨架、細胞活動及能量代謝有關(guān)的12個蛋白質(zhì)在內(nèi)異癥患者表達異常。這些蛋白可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生，并藉此可成為內(nèi)異癥診斷及監(jiān)測的血清學標志物。 3、細胞角蛋白(CK)是一組細胞骨架蛋白，本研究發(fā)現(xiàn)CK1在內(nèi)異癥患者血清中有高表達，亦可稱為內(nèi)異癥之候選標志物。