子宮內(nèi)膜異位癥相關差異基因的篩選及鑒定.pdf

1、研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosisEMS)是指子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外身體其它部位而引起系列臨床表現(xiàn)的一種常見良性婦科疾病。目前發(fā)病機理尚不明確，大量研究集中在患者在位和異位內(nèi)膜的差異對比上。而近年相關資料表明，EMS具有家族傾向性和遺傳性，說明患者與非患者在位內(nèi)膜存在的基因表達差異是EMS發(fā)病的關鍵因素之一。因此，本課題重點篩選患者與非患者在位內(nèi)膜的差異基因，并應用多種方法對相關差異基因進行鑒定，從源頭上尋找與子

2、宮內(nèi)膜異位癥相關的發(fā)病機制。 第一部分應用表達譜基因芯片篩選子宮內(nèi)膜異位癥相關差異基因 目的：廣譜篩選EMS患者在位內(nèi)膜與非EMS患者在位內(nèi)膜的表達差異基因，并初步分析相關差異基因的功能及在EMS發(fā)病機制中的作用。方法：選用含有14112位點的人類表達譜cDAN基因芯片，采用等比混合的方法消除個體遺傳非特異性差異，篩選EMS患者與非EMS患者不同月經(jīng)周期在位子宮內(nèi)膜的差異表達基因。結果：共篩選出增生期差異基因193個，其

3、中上調(diào)58個，下調(diào)135個；分泌期差異基因93個，其中上調(diào)6個，下調(diào)87個；增生期和分泌期共同差異基因20個，其中上調(diào)1個，下調(diào)19個。結論：應用表達譜芯片可有效廣譜篩選出子宮內(nèi)膜異位癥相關的差異基因。 第二部分子宮內(nèi)膜異位癥相關差異基因的鑒定 目的：對差異基因基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑3(TIMP-3)及基質(zhì)金屬蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)進行初步鑒定，研究其在EMS患者及非患者在位子宮內(nèi)膜整個月經(jīng)周期中的

4、表達情況。方法：1、采用免疫組化鏈素親和素-生物素(SABC)法分別測定EMS在位子宮內(nèi)膜60例、正常子宮內(nèi)膜72例上MMP-2、MMP-9、TIMP-3蛋白表達情況。2、用RT-PCR技術測定子宮內(nèi)膜異位癥在位子宮內(nèi)膜39例、正常子宮內(nèi)膜31例MMP-2、MMP-9、TIMP-3的mRNA表達強度。3、用明膠酶譜法測定子宮內(nèi)膜中MMP-2和MMP-9的蛋白活性及表達水平。結果：1、免疫組化結果顯示MMP-2、MMP-9在非患者內(nèi)膜中呈

5、低表達，在患者在位內(nèi)膜中呈高表達；TIMP-3在非患者內(nèi)膜中呈高表達，在患者在位內(nèi)膜中呈低表達。2、RT-PCR結果顯示，對照組內(nèi)膜細胞上MMP-2、MMP-9mRNA的表達呈階段依賴性，增生期高于分泌期。整個月經(jīng)周期中，研究組在位內(nèi)膜中MMP-2、MMP-9的表達均持續(xù)高于對照組(P＜0.05)，且表達無周期性；研究組TIMP-3表達明顯低于對照組。3、實驗組明膠酶活性高于對照組，且以92KD的酶原型MMP-9表達為主。結論：在EMS