子宮內(nèi)膜異位癥血瘀證差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、背景：子宮內(nèi)膜異位癥（Endometriosis，EMT）是育齡婦女的多發(fā)病，嚴(yán)重影響女性生殖健康和生活質(zhì)量。證候是疾病一定階段病因、病位、病性、病勢的綜合表現(xiàn)，也是中醫(yī)藥理論研究的核心內(nèi)容，開展中醫(yī)“證候”本質(zhì)研究，揭示證候的科學(xué)內(nèi)涵是中醫(yī)基礎(chǔ)理論現(xiàn)代化進(jìn)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而證候生物學(xué)基礎(chǔ)研究的突破則是證候科學(xué)內(nèi)涵得以闡明的保障。血瘀證是中醫(yī)臨床多種疾病的基本證型，也是子宮內(nèi)膜異位癥的核心證候類型。在前期研究中，曾發(fā)現(xiàn)該證型的異位和在位

2、內(nèi)膜在組織形態(tài)學(xué)和細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的表達(dá)存在差異，為從蛋白組學(xué)水平探索EMT的不同證候的特異性標(biāo)志物的研究工作奠定了基礎(chǔ)。對子宮內(nèi)膜異位癥血瘀證進(jìn)行深入、系統(tǒng)的現(xiàn)代研究，有助于對本病的準(zhǔn)確診斷和有效治療。
　　目的：
　?、偻ㄟ^蛋白組學(xué)技術(shù)分離并鑒定EMT血瘀證、氣滯血瘀證、腎虛血瘀證患者在位和異位內(nèi)膜的差異蛋白質(zhì)，尋找EMT證候特異性蛋白質(zhì)；
　　②從蛋白質(zhì)水平探討EMT血瘀證、氣滯血瘀證、腎虛血瘀證的實(shí)質(zhì)，揭示EM

3、T血瘀證辨證的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，建立EMT的蛋白質(zhì)分子微觀辨證和診斷體系，探討EMT證候的演變規(guī)律、證候的辨治靶點(diǎn)，尋找有意義的分子標(biāo)記物及基因干預(yù)的靶點(diǎn)。
　　方法：取6例EMT血瘀證、氣滯血瘀證、腎虛血瘀證患者增生期在位和異位內(nèi)膜組織和6例增生期正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，將各種證型的每兩例標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)等量混勻，得到3組標(biāo)本并提取組織總蛋白。通過雙向電泳技術(shù)得到3組雙向電泳凝膠圖譜。檢測出的表達(dá)差異點(diǎn)經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜

4、（MALDI-TOF-TOF/MS）及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。
　　結(jié)果：在3組差異蛋白中進(jìn)行比較，最終得到三次重復(fù)試驗(yàn)所獲得的各證型的差異蛋白。其中血瘀證在位內(nèi)膜差異蛋白2個，異位內(nèi)膜差異蛋白1個。腎虛血瘀證在位內(nèi)膜差異蛋白3個，異位內(nèi)膜差異蛋白3個。氣滯血瘀證瘀型在位內(nèi)膜差異蛋白3個，異位內(nèi)膜差異蛋白4個。根據(jù)各證型差異蛋白比較，可以發(fā)現(xiàn)膜聯(lián)蛋白在腎虛血瘀證在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜均有高表達(dá)，肌球蛋白輕鏈3在氣滯血瘀證在位內(nèi)