采用蛋白質(zhì)組學技術篩選鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關蛋白.pdf

1、背景和目的： 鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是原發(fā)于鼻咽粘膜上皮的惡性腫瘤，是我國發(fā)病率最高的十大惡性腫瘤之一，也是最常見的頭頸部腫瘤。NPC發(fā)病隱匿，發(fā)現(xiàn)時常常已有頸部淋巴結和遠處轉(zhuǎn)移，因此，鼻咽癌轉(zhuǎn)移機制及控制轉(zhuǎn)移是目前鼻咽癌研究的重大課題，同時為進一步揭開鼻咽癌轉(zhuǎn)移的分子機制提供理論和實驗依據(jù)。蛋白質(zhì)組學技術具有高通量、高靈敏的特點，實時、階段表達蛋白的差異分析，為篩選和鑒定腫瘤生物學標

2、志物提供可靠的技術。本研究有可能為闡明鼻咽癌轉(zhuǎn)移機制及尋找預測鼻咽癌轉(zhuǎn)移的標志物提供理論依據(jù)。 方法： 體外培養(yǎng)人鼻咽癌細胞株CNE1(高分化鱗癌細胞)和CNE2(低分化鱗癌細胞)，細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，抽取細胞總蛋白，采用雙向凝膠電泳(2-DE)分離人鼻咽癌細胞株CNE1和CNE2總蛋白，考染顯色，ImageMaster5.0圖像分析系統(tǒng)分析，從膠中選取分離的差異蛋白質(zhì)點，基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-

3、TOF-MS)分析獲取肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫鑒定差異蛋白質(zhì)，篩選并初步鑒定出與鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關的蛋白質(zhì)。而后，把篩選出的差異蛋白質(zhì)丙酮酸激酶作為靶蛋白，利用細胞免疫組化驗證丙酮酸激酶在兩種細胞株的表達情況。 結果： 經(jīng)雙向凝膠電泳分離細胞總蛋白后，采用質(zhì)譜技術鑒定和生物信息學分析得出六個蛋白，在CNE1細胞株中特異性表達的蛋白質(zhì)：丙酮酸激酶、β肌動蛋白和20s蛋白酶體。在CNE2細

4、胞株特異性表達的蛋白質(zhì)：腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、蛋白酶β-6亞基和血小板活化因子乙酰水解酶。在上述差異表達的蛋白質(zhì)中，發(fā)現(xiàn)部分蛋白質(zhì)參與細胞運動、細胞骨架、信號轉(zhuǎn)導、細胞凋亡、能量代謝等，提示鼻咽癌轉(zhuǎn)移過程的發(fā)生是多種蛋白質(zhì)功能共同作用的結果。再通過細胞免疫組化的方法從蛋白水平上驗證了丙酮酸激酶，試驗結果顯示：在細胞株CNE1中呈彌漫性強陽性表達，而在細胞株CNE2中呈局灶性陽性表達。 結論： 1.蛋白質(zhì)組學技術是快速、有

5、效篩選鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關蛋白的理想方法。本課題應用雙向凝膠電泳技術，獲得了分辨率高、重復性較好的人鼻咽癌細胞株CNE1和CNE2蛋白質(zhì)表達圖譜。 2.人鼻咽癌細胞株CNE1和CNE2具有明顯的差異表達蛋白質(zhì)圖譜，本研究共分離鑒定出可能與鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關的6種差異蛋白，分別是：丙酮酸激酶、β肌動蛋白、20s蛋白酶體、腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、蛋白酶β-6亞基和血小板活化因子乙酰水解酶。 3.利用細胞免疫組化的方法對差異蛋白中的丙酮酸