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文檔簡介
1、目的:
鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國常見的惡性腫瘤之一,具有高度的侵襲性和轉(zhuǎn)移性,其中以中國廣東和廣西兩省發(fā)病率最高,達到25-40/10萬人/年。早期鼻咽癌患者的5年生存率高達95%,而晚期患者生存率不到75%。用于篩查和輔助診斷鼻咽癌的血清標(biāo)志物主要是EB病毒相關(guān)抗體(如VCA-IgA)或EB病毒DNA(EBV-DNA),但這些檢測方法的敏感度及特異度仍不夠理想。由于缺乏早期的篩
2、查方法,臨床上鼻咽癌診斷時往往已到中晚期階段,嚴(yán)重影響治療效果。最近有研究表明,某些腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體在腫瘤早期,甚至是癌前病變階段就已在患者血清中出現(xiàn),檢測其含量可能成為早期腫瘤診斷方法;并且,多種腫瘤自身抗體聯(lián)合檢測可以顯著提高檢測的敏感度。我們先前研究發(fā)現(xiàn),腫瘤自身抗體是鼻咽癌潛在的早期診斷分子標(biāo)志物?;诖?,本研究擬通過應(yīng)用血清蛋白質(zhì)組分析技術(shù),篩選新的鼻咽癌自身抗體分子標(biāo)志物,并進一步擴大樣本量,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測驗
3、證自身抗體在鼻咽癌中的診斷價值;最后,聯(lián)合VCA-IgA,建立新的自身抗體聯(lián)合 VCA-IgA鼻咽癌診斷模型。通過本研究,可為鼻咽癌早期診斷提供新的分子標(biāo)志物,彌補檢測 EB病毒在鼻咽癌診斷方面的不足,進一步提高鼻咽癌早期診斷率。
方法:
收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院7例鼻咽癌患者和7例年齡性別匹配的正常人血清標(biāo)本。培養(yǎng)人鼻咽癌細胞CNE2,提取CNE2總蛋白,運用血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù),即將CNE2總蛋白經(jīng)雙向電
4、泳分離后,凝膠進行銀染或轉(zhuǎn)膜后做免疫印跡(以鼻咽癌患者血清和正常人血清作為一抗),比較差異表達蛋白點,取差異蛋白點進行質(zhì)譜鑒定,篩選可以誘導(dǎo)鼻咽癌患者產(chǎn)生自身抗體的腫瘤相關(guān)抗原。應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),檢測汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院129例鼻咽癌患者和100例正常對照者血清中自身抗體和 VCA-IgA的水平,聯(lián)合運用受試者工作特征(ROC)曲線和 logistics回歸分析,評價新鑒定的自身抗體分子標(biāo)志物在鼻咽癌中的診斷
5、價值,以及新的EB病毒抗體-自身抗體模型在鼻咽癌中的聯(lián)合診斷價值。
結(jié)果:
血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù),篩選鑒定了PRDX2、PRDX3、Nucleoside diphosphate kinase、ENO1、HSPA8、Serine-threonine kinase receptor-associated protein、HSPD1、Serpin B5、L-lactate dehydrogenase B、Gamma-gl
6、utamylcyclotransferase、Vimentin、Isoform2 of Macrophage-capping protein、Annexin A2等14種鼻咽癌潛在的腫瘤相關(guān)抗原。在此基礎(chǔ)上,我們采用間接ELISA,檢測分析了PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在129例鼻咽癌患者和100例正常對照者血清中的水平,結(jié)果顯示PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在鼻咽癌患者組血清中的水平均顯著高于正常對照組(P<0.01
7、)。ROC曲線分析顯示,在鼻咽癌中,PRDX2和PRDX3自身抗體的診斷敏感度分別為26.4%和24.5%,特異度分別為96.0%和95.0%,曲線下面積分別為0.614(95%置信區(qū)間為0.542-0.686)和0.600(95%置信區(qū)間為0.528-0.673);RDX2自身抗體和PRDX3自身抗體聯(lián)合檢測對鼻咽癌的診斷敏感度為36.4%,特異度為95.0%,曲線下面積為0.632(95%置信區(qū)間為:0.561-0.703),對早期
8、鼻咽癌的診斷敏感度為40.0%,特異度為95.0%,曲線下面積0.664(95%置信區(qū)間為0.550-0.779);聯(lián)合檢測PRDX2自身抗體、PRDX3自身抗體和VCA-IgA進一步提高了對鼻咽癌的診斷效能,敏感度66.7%,特異度95.0%,曲線下面積為0.811(95%置信區(qū)間為0.753–0.869),對早期鼻咽癌的診斷敏感度50.0%,特異度95.0%,曲線下面積為0.754(95%置信區(qū)間為0.652–0.857)。
9、 結(jié)論:
?、胚\用血清蛋白質(zhì)組學(xué)方法,我們篩選鑒定了PRDX2、PRDX3、Nucleoside diphosphate kinase、ENO1、HSPA8、Serine-threonine kinase receptor-associated protein、HSPD1、Serpin B5、L-lactate dehydrogenase B、Gamma-glutamylcyclotransferase、Vimentin、Is
10、oform2 of Macrophage-capping protein、Annexin A2等14種潛在的腫瘤相關(guān)抗原,提示針對這些腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體可能是鼻咽癌潛在的診斷分子標(biāo)志物。⑵PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在鼻咽癌患者血清中水平升高,可能作為鼻咽癌潛在的診斷分子標(biāo)志物。⑶相對于單獨檢測,PRDX2自身抗體、PRDX3自身抗體和 VCA-IgA的聯(lián)合檢測進一步提高了對鼻咽癌的診斷效能,證實自身抗體和VCA-IgA聯(lián)
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