應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選胃癌細(xì)胞差異表達(dá)蛋白.pdf

1、目的：通過使用雙向電泳技術(shù)，分離并篩選低分化胃癌細(xì)胞(BGC-823)、中分化胃癌細(xì)胞(SGC-7901)及正常胃粘膜細(xì)胞(GES-1)差異表達(dá)蛋白。結(jié)合MALDI-TOF-TOF-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行差異蛋白的鑒定。鑒定出的差異蛋白可作為腫瘤標(biāo)志物，為闡述胃癌的發(fā)病機(jī)制、臨床上早期診斷及預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。
　　 方法：⑴體外培養(yǎng)低分化胃癌細(xì)胞(BGC-823)、中分化胃癌細(xì)胞(SGC-7901)及正常胃粘膜細(xì)胞(GES-

2、1)，分別提取蛋白，采用雙向電泳技術(shù)分離蛋白，使用PDQuestTM2-D Analysis Software8.0軟件分析篩選差異蛋白。⑵篩選感興趣的差異蛋白位點(diǎn)，進(jìn)行MALDI-TOF-TOF-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。
　　 結(jié)果：①應(yīng)用雙向電泳技術(shù)成功分離低分化胃癌細(xì)胞(BGC-823)、中分化胃癌細(xì)胞(SGC-7901)及正常胃粘膜細(xì)胞(GES-1)的蛋白位點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)GES-1細(xì)胞的電泳結(jié)果中總共有1403±17個(gè)蛋白位點(diǎn)

3、，BGC-823細(xì)胞及SGC-7901細(xì)胞的電泳結(jié)果分別得到1407±15、1406±11個(gè)蛋白位點(diǎn)。從GES-1細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞之間配對(duì)后差異蛋白位點(diǎn)的結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)有48個(gè)差異蛋白位點(diǎn)，表達(dá)上調(diào)的有22個(gè)，表達(dá)下調(diào)的有26個(gè)。從GES-1細(xì)胞與SGC-7901細(xì)胞之間配對(duì)后差異蛋白位點(diǎn)的結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)有87個(gè)差異蛋白位點(diǎn)，表達(dá)上調(diào)得有47個(gè)，表達(dá)下調(diào)得有40個(gè)。②應(yīng)甩MALDI-TOF-TOF串聯(lián)質(zhì)譜在上述蛋白中，各選擇10個(gè)蛋

4、白位點(diǎn)(差異倍數(shù)大于2倍)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。成功鑒定出16個(gè)蛋白位點(diǎn)，其中有4個(gè)表達(dá)上調(diào)，12個(gè)表達(dá)下調(diào)。這些蛋白大致可分為：大致分為以下4類：(1)代謝相關(guān)酶類：焦磷酸酶1(PPA1)、磷酸甘油酸脫氫酶(PHGDH)、乳酸脫氫酶(LDHB)，烯醇化酶(ENO1)；(2)分子伴侶：熱休克蛋白90β(HSP90β)、熱休克蛋白70(HSP70)；(3)細(xì)胞骨架蛋白：角蛋白7(CK7)、膜突蛋白(Moesin)、核纖層蛋白(Lamin)；(4)

5、其他：泛醌蛋白1(UBQLN1)、γ肌動(dòng)蛋白1(ACTG1)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSTP1)、人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)、胞質(zhì)內(nèi)色氨酰tRNA合成酶(WARS)、T型復(fù)合蛋白β亞基(CCT2)、異質(zhì)性核糖核蛋白(HNRNPF)。
　　 結(jié)論：⑴應(yīng)用雙向電泳技術(shù)成功分離并篩選出與胃癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的差異蛋白。每張膠圖上成功分離1400多個(gè)蛋白位點(diǎn)，較高的分辨率有利于篩選差異蛋白。⑵利用MALDI-TOF-TOF-MS/M

6、S串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，成功鑒定出其中16個(gè)差異倍數(shù)在2倍以上蛋白位點(diǎn)，包括4個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，12個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。大致分為：代謝相關(guān)酶類、分子伴侶、細(xì)胞骨架等其他。其中焦磷酸酶1(PPA1)在低分化胃癌細(xì)胞BGC-823中的高表達(dá)，國內(nèi)外尚未見報(bào)道。乳酸脫氫酶(LDHB)、磷酸甘油酸脫氫酶(PHGDH)、γ肌動(dòng)蛋白1(ACTG1)、人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)和T型復(fù)合蛋白β亞基(CCT2)，國內(nèi)尚未見報(bào)道。這些結(jié)果可為今后胃癌致癌機(jī)