鼻咽癌細(xì)胞系5-8F與6-10B總蛋白質(zhì)與分泌蛋白質(zhì)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、鼻咽癌(NPC)是一種好發(fā)于東南亞地區(qū)及我國南方各省的常見惡性腫瘤。早期轉(zhuǎn)移是NPC的顯著特征之一和患者死亡的主要原因，而且NPC放療后局部殘?jiān)顝?fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移亦是制約其療效和預(yù)后的瓶頸。因此，研究NPC的轉(zhuǎn)移機(jī)制、尋找預(yù)測轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物對NPC療效和預(yù)后起關(guān)鍵作用，具有重要的理論和臨床應(yīng)用價(jià)值。 本研究以一對來自同一親本、具有不同轉(zhuǎn)移潛能的NPC細(xì)胞系5-8F和6-10B為轉(zhuǎn)移模型，應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離5-8F

2、和6-10B細(xì)胞的總蛋白和分泌蛋白質(zhì)；利用PDQuest圖像分析軟件比較兩株細(xì)胞總蛋白和分泌蛋白質(zhì)2-DE圖譜的異同；應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF MS/MS)鑒定差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，并利用生物信息學(xué)資源對所鑒定蛋白質(zhì)的功能和亞細(xì)胞定位進(jìn)行分析。然后采用Western blot驗(yàn)證部分差異蛋白質(zhì)在5-8F和6-10B細(xì)胞中的表達(dá)水平，采用免疫組化染色

3、檢測差異蛋白質(zhì)nm23-H1在NPC組織和頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NPC中的表達(dá)。主要結(jié)果如下： 1.建立了高轉(zhuǎn)移NPC細(xì)胞系5-8F和無轉(zhuǎn)移潛能的NPC細(xì)胞系6-10B細(xì)胞總蛋白和分泌蛋白質(zhì)的2-DE圖譜，識別了123個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，鑒定出29個(gè)非冗余的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，并對這些蛋白質(zhì)進(jìn)行了功能分類和亞細(xì)胞定位； 2.Western blot分析結(jié)果顯示：差異蛋白質(zhì)Annexin A1、Stratifin、Keratin-8

4、和nm23-H1在5-8F和6-10B細(xì)胞中的差異表達(dá)水平與比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致； 3.nm23-H1在高轉(zhuǎn)移的5-8F NPC細(xì)胞總蛋白中的表達(dá)水平高于無轉(zhuǎn)移潛能的6-10B細(xì)胞，在頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NPC中的表達(dá)水平亦高于原發(fā)NPC； 4、差異蛋白質(zhì)肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶A(PPIA)存在乙?；⒐习彼峄蛘弑饺樗峄揎棥?本研究鑒定了29個(gè)可能與NPC轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)nm23-H1可能具有促進(jìn)NPC轉(zhuǎn)移