肺癌細胞無血清培養(yǎng)差異蛋白質(zhì)組學研究方法的建立與應用.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院內(nèi)蒙古醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院碩士學位論文肺癌細胞無血清培養(yǎng)差異蛋白質(zhì)組學研究方法的建立與應用姓名：李蕾申請學位級別：碩士專業(yè)：藥物分析學指導教師：錢小紅20030630摘要分離效果明顯提高，利用透析袋所獲得的透析效果明顯好于透析管。3對蛋白質(zhì)的膠上酶切方法進行了考察，通過對sDs—PAGE分離膠上蛋白質(zhì)進行還原、烷基化等處理，改變酶切條件，得到一種適用于sDs，PAGE分離蛋白質(zhì)的酶切方法。4應用SDs—PAGE

2、與MALDI—TOF—MS聯(lián)用的方法，得到了一個在肺癌中高表達的蛋白質(zhì)MMP1，同時，臨床免疫組化實驗證明MMP一1定位于細胞漿，在肺癌組織高表達。5應用SDS—PAGE與nanoLC—ESI—MS—MS聯(lián)用方法分析成對臨床病人的樣品，從腫瘤細胞無血清培養(yǎng)基中鑒定出127個分泌蛋白質(zhì)，正常細胞培養(yǎng)基中鑒定出113個蛋白質(zhì)；腫瘤培養(yǎng)基內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的分泌蛋白質(zhì)為110個，正常細胞培養(yǎng)基內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的分泌蛋白質(zhì)為105個，僅在腫瘤細胞無血清培養(yǎng)基中發(fā)

3、現(xiàn)的蛋白質(zhì)為42個，僅從正常支氣管上皮細胞無血清培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)為35個。6對鑒定的分泌蛋白質(zhì)做了臨床免疫組化與wjst鋤blotting分析。文獻調(diào)研表明，其中大部分分泌蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，如：nm23一H1在人肺癌中呈高表達，和腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)；多篇文獻報道，14—3～3和肺癌發(fā)生也有相關(guān)性，有可能作為潛在的診斷標志物之一。7初步建立了肺癌組織細胞分泌蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，包含腫瘤細胞表達蛋白質(zhì)177個，正常上皮細胞表達蛋白