胰腺癌血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、胰腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。近年來，胰腺癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈明顯上升趨勢(shì)，但生存率卻無明顯提高，在所有癌癥中5年生存率是最低的。早期診斷是改善胰腺癌預(yù)后的關(guān)鍵。胰腺癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，缺乏有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法和技術(shù)為胰腺癌的早期診斷、防治和發(fā)病機(jī)制的研究提供了有利條件。 目的：1.應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)尋找并鑒定胰腺癌患者與胃癌、胰腺良性疾病和健康對(duì)照者血清之間的差異表達(dá)蛋白。

2、2.對(duì)以前未報(bào)道過的2種差異蛋白(細(xì)胞周期蛋白-Ⅰ和Rab GDP解離抑制因子β)進(jìn)行驗(yàn)證，為尋找胰腺癌血清候選標(biāo)志物以及可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制相關(guān)的蛋白質(zhì)提供新的線索。 方法：1.收集胰腺癌、胃癌、胰腺良性疾病及正常對(duì)照者血清各16例。同組等量混合，用白蛋白/IgG去除試劑盒過濾血清，再對(duì)經(jīng)過除鹽濃縮后的各組混合血清樣品分別進(jìn)行雙向凝膠電泳。雙向凝膠電泳軟件分析，將胰腺癌與其他三組比較的共同的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)行基質(zhì)輔助激光解吸

3、電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析獲得肽質(zhì)量指紋圖，然后利用Mascot查詢軟件搜尋SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。2.采用免疫印跡和免疫組化的方法對(duì)篩選出的候選蛋白細(xì)胞周期蛋白-I(cyclin-Ⅰ)和Rab GDP解離抑制因子β(Rab GDI β)進(jìn)行驗(yàn)證。用于cyclin-Ⅰ免疫印跡驗(yàn)證的是胰腺癌和胰腺良性疾病血清各12例。用于Rab GDI β免疫印跡驗(yàn)證的血清標(biāo)本包括胰腺癌，胰腺良性疾病和正常對(duì)照各18例

4、以及10例膽道結(jié)石或良性狹窄；胰液標(biāo)本包括胰腺癌和胰腺良性疾病各l0例。另對(duì)36例胰腺癌患者的組織及其癌旁組織標(biāo)本、9例良性胰腺疾病和1例正常胰腺組織標(biāo)本分別進(jìn)行cyclin-Ⅰ和Rab GDIβ的免疫組化研究。 結(jié)果：1.獲得了重復(fù)性好的血清蛋白質(zhì)組雙向凝膠電泳圖譜。圖譜比較得到9個(gè)在胰腺癌高表達(dá)的差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定發(fā)現(xiàn)其中2個(gè)點(diǎn)為cyclin-Ⅰ，另有4個(gè)點(diǎn)分別為Rab GDIβ、α-1-抗胰蛋白酶前體、觸珠蛋白前體

5、和轉(zhuǎn)鐵蛋白前體。2.免疫印跡結(jié)果顯示雖然在胰腺癌及胰腺良性疾病的血清標(biāo)本中，分別都有約1/3的血清標(biāo)本高表達(dá)cyclin-Ⅰ，但是，在胰腺癌組發(fā)現(xiàn)提示蛋白質(zhì)修飾或蛋白質(zhì)片斷的多重條帶或遷移帶，這在胰腺良性疾病組幾無；而Rab GDI β可在100％的胰腺癌血清、80％的胰腺癌胰液，50％的胰腺良性疾病血清，30％膽管結(jié)石或良性狹窄血清中檢測(cè)到，而在正常血清和膽管結(jié)石或良性狹窄胰液中未檢測(cè)到。免疫組化結(jié)果表明cyclin-Ⅰ在絕大多數(shù)的胰