CCNE1及其剪接異構(gòu)體表達(dá)與胃癌發(fā)生的關(guān)系.pdf

1、[目的]在基因和蛋白水平檢測(cè)胃癌組織中CCNE1的表達(dá)，研究其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，從CCNE1表達(dá)調(diào)控機(jī)制出發(fā)選擇其剪接異構(gòu)體，進(jìn)一步檢測(cè)基因剪接異構(gòu)體在胃癌原發(fā)組織及其配對(duì)癌旁正常組織中的表達(dá)，探討CCNE1及其基因剪接異構(gòu)體與胃癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。
　　 [方法]2007年9月到2009年7月收集34例實(shí)施胃癌根治術(shù)的患者的手術(shù)切除標(biāo)本，所選取標(biāo)本均于術(shù)后1小時(shí)內(nèi)取回、分裝并于液氮凍存；通過(guò)生物信息學(xué)方法-Oncomin

2、e(腫瘤微陣列數(shù)據(jù)庫(kù))分析CCNE1在胃癌原發(fā)灶及其配對(duì)正常組織中的差異表達(dá)情況。根據(jù)生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果，采用SYBR Green-實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)檢測(cè)34例手術(shù)切除的胃癌原發(fā)組織、癌旁正常組織配對(duì)樣本中CCNE1基因及其2種基因替換剪接異構(gòu)體(CCNE1 typeⅡ、CCNE1 typeⅢ)的mRNA的相對(duì)表達(dá)變化，并分析CCNE1基因及其替換剪接異構(gòu)體的相對(duì)表達(dá)變化與疾病分期之間的關(guān)系。采用組織芯片/組織微陣列(TMA)技術(shù)

3、結(jié)合免疫組織化學(xué)方法(EnVision二步法)檢測(cè)CCNE1在34例配對(duì)樣本中的蛋白表達(dá)情況及亞細(xì)胞定位，并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　 [結(jié)果]胃癌原發(fā)灶CCNE1 mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織(P＜0.01)，在胃癌組織中CCNE1 mRNA表達(dá)水平在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期均呈現(xiàn)顯著上調(diào)(P=0.042，P=0.016)。CCNE1替換剪切異構(gòu)體CCNE1 typeⅡ和CCNE1 typeⅢ經(jīng)SYBR Gree

4、n-real time PCR檢測(cè)顯示同癌旁正常組織相比較，兩種異構(gòu)體在胃癌原發(fā)灶中表達(dá)上調(diào)(P=0.015，P=0.019)，異構(gòu)體CCNE1 typeⅠ、CCNE1 typeⅣ的表達(dá)水平在胃癌原發(fā)組織和癌旁正常組織中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.383，P=0.412).組織微陣列(TMA)技術(shù)結(jié)合免疫組化方法顯示：在胃癌原發(fā)組織中CCNE1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率(14/34)顯著高于癌旁正常組織0％(0/34)及胃炎組織0％(0/34)(P＜