草魚ADAR1 (adenosine deaminase acting on RNA 1)及其剪接異構(gòu)體ADAR1-like的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析.pdf

1、 分類號： 密級： U D C： 學(xué)號：405604413051 南 昌 大 學(xué) 碩 士 研 究 生 學(xué) 位 論 文 草魚 草魚 ADAR1 (adenosine deaminase acting on RNA 1)及其剪接異構(gòu)體 及其剪接異構(gòu)體 ADAR1-like 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析

2、的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析 Transcriptional regulation of ADAR1, ADAR1-like in grass carp (Ctenopharyngodon idella) 孫志成 培養(yǎng)單位（院、系）：生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)系 指導(dǎo)教師姓名、職稱：胡成鈺 教授 申請學(xué)位的學(xué)科門類：理學(xué) 學(xué) 科 專 業(yè) 名 稱 ：動物學(xué) 論 文 答 辯 日 期 ：2016 年 5 月 27 日 答辯委員會主席：

3、 評閱人： 2016 年 5 月 20 日摘 要 II 摘 要 ADAR1(adenosine deaminase acting on RNA 1)是一種經(jīng)典的干擾素效應(yīng)蛋白， 能通過 A-to-I 編輯功能對外源病毒 dsRNA 進(jìn)行編輯， 從而發(fā)揮抗病毒功能。此外，作為一種 dsRNA 結(jié)合蛋白，ADAR1 還能通過與病毒或細(xì)胞內(nèi)的其它dsRNA 結(jié)合蛋白相互作用參與先天免疫等多種生理反應(yīng)。哺乳類 ADA

4、R1 有許多剪接異構(gòu)體，目前研究較多的為 p150 和 p110。p150 蛋白是全長 ADAR1，而 p110 蛋白缺少一個(gè) Z-DNA 結(jié)合域(Zα)，它們是由各自的啟動子啟動轉(zhuǎn)錄。實(shí)驗(yàn)室前期克隆和鑒定了草魚 ADAR1 兩個(gè)剪接異構(gòu)體基因及其基因組序列并分別命名為 CiADAR1 和 CiADAR1-like。 研究發(fā)現(xiàn)， 兩者在 poly I:C 刺激下都有不同程度的表達(dá)上調(diào)，說明 CiADAR1 和 CiADAR1-like

5、都可能參與了細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)。 為了進(jìn)一步明確 CiADAR1 和 CiADAR1-like 的基因組排布，我們確定了CiADAR1、CiADAR1-like 各自的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TSS)，證實(shí) CiADAR1 和CiADAR1-like 是由不同的啟動子啟動轉(zhuǎn)錄，且有著不同的第一個(gè)外顯子，其大小分別為 78bp 和 297bp。CiADAR1 和 CiADAR1-like 共用第二個(gè)外顯子上的翻譯起始位點(diǎn)(TIS)，不過由于選擇性剪接

6、引起 CiADAR1-like 蛋白翻譯提前終止，最終導(dǎo)致 CiADAR1 和 CiADAR1-like 的蛋白結(jié)構(gòu)在 N 端完全一致，只在 C 端脫氨酶區(qū)域上存在差異。 為研究草魚 ADAR1 及其剪接異構(gòu)體轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制，我們克隆了長度分別為 1080bp、1173bp 的 CiADAR1、CiADAR1-like 啟動子片段。啟動子在線軟件分析表明 CiADAR1 啟動子有一個(gè)典型的 TATA 盒且可以分為兩個(gè)區(qū)域，靠近轉(zhuǎn)錄起

7、始位點(diǎn)有 3 個(gè)干擾素調(diào)節(jié)因子結(jié)合元件(IRF-E)的近端區(qū)域(Pp)和只有 1 個(gè) IRF-E 的遠(yuǎn)端區(qū)域(Pd)； CiADAR1-like 啟動子上含有 8 個(gè) IRF-E 元件和 3個(gè)干擾素刺激應(yīng)答元件(ISRE)。 提示 CiADAR1 及其異構(gòu)體基因可能受到 IRF 的調(diào)控。 為研究 IRF 與 CiADAR1 的親和性，我們表達(dá)并純化了 CiIRF1 和 CiIRF3蛋白。 體外凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 CiIRF1 和 Ci