共培養(yǎng)體系中小鼠淋巴細胞RNA編輯酶ADAR1的表達及ADAR1在小鼠細胞免疫應答中的作用研究.pdf

1、本實驗通過建立共培養(yǎng)細胞體系，觀察小鼠淋巴細胞在異種抗原細胞的刺激下ADAR1的表達情況；并通過siRNA質(zhì)粒下調(diào)小鼠淋巴細胞ADAR1的表達，觀察ADAR1表達抑制后的淋巴細胞免疫功能的變化。首次系統(tǒng)的對ADAR1在不同功能狀態(tài)下淋巴細胞中的表達和在細胞免疫應答中的作用進行了研究，以探索A-to-IRNA編輯在免疫排斥反應中的病理生理意義以及為臨床應用提供理論依據(jù)。 第一部分：共培養(yǎng)體系中小鼠淋巴細胞ADAR1的表達。

2、 將小鼠脾淋巴細胞分為三個處理組。實驗組：以HCC(人肝細胞肝癌細胞)作為刺激細胞，以1∶5的比例與小鼠淋巴細胞進行共培養(yǎng)；對照組：將小鼠淋巴細胞進行相同培養(yǎng)條件下的單獨培養(yǎng)；免疫抑制組：將免疫抑制劑FK506預處理后的小鼠脾淋巴細胞，與刺激細胞進行共培養(yǎng)。分別取培養(yǎng)1，2，4，6，，8，10，12，16，20及24h的各組小鼠淋巴細胞，用半定量PCR的方法檢測ADAR1的表達，觀察各處理組小鼠淋巴細胞ADAR1隨時間的表達變化曲線。

3、 結(jié)果顯示，共培養(yǎng)組RNA編輯酶ADAR1的表達呈降低后升高、再降低的趨勢；對照組呈一直降低、至12h后維持在較低的水平；FK506對ADAR1的表達呈現(xiàn)明顯的抑制，與共培養(yǎng)組和對照組相比，這種抑制隨著共培養(yǎng)時間的延長而減弱。提示小鼠淋巴細胞ADAR1在異種抗原的刺激下表達活躍，其表達的高低與淋巴細胞的功能狀態(tài)有關(guān)。 第二部分：RNA編輯酶ADAR1在小鼠細胞免疫應答中的作用研究。 構(gòu)建小鼠ADAR1反義質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染

4、實驗證明干涉效果理想；反復凍融人肝癌細胞株，制備腫瘤細胞可溶性抗原，將分離出的小鼠原代淋巴細胞以ADAR1siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，然后以腫瘤細胞可溶性抗原致敏，以此作為實驗組；設(shè)原代培養(yǎng)未經(jīng)轉(zhuǎn)染的致敏小鼠淋巴細胞為對照組，采用細胞毒性實驗檢測ADAR1對淋巴細胞免疫功能的影響。 研究結(jié)果：實驗組淋巴細胞對靶細胞的殺傷作用明顯弱于對照組(P＜0．05)。提示RNA編輯酶ADAR1在小鼠細胞免疫中有重要作用，下調(diào)RNA編輯酶ADAR1表