RNA編輯酶ADAR1對小鼠淋巴細(xì)胞周期和凋亡的影響.pdf

1、RNA編輯（RNA editing）是DNA轉(zhuǎn)錄成RNA后,RNA編輯酶（RNA editing enzyme）對前體mRNA中的核苷酸進(jìn)行刪除、添加或重新修飾的過程。它改變了基因的序列以及遺傳信息,從而產(chǎn)生廣泛的生理效應(yīng)。RNA編輯酶以脫氨方式使得RNA特異位點的腺嘌呤脫氨轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤,或者是特異位點的胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?而次黃嘌呤在堿基配對時被識別為鳥嘌呤。這些替換使得原有遺傳密碼或者剪切位點發(fā)生轉(zhuǎn)變,從而使其編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能

2、發(fā)生改變。ADAR1(RNA依賴性腺嘌呤脫氨酶,adenosine deaminase acting on RNA)是研究最為廣泛的一種RNA編輯酶。研究顯示淋巴細(xì)胞增殖時ADAR1表達(dá)顯著升高，而降低ADAR1表達(dá)后淋巴細(xì)胞殺傷功能顯著降低。提示ADAR1可能通過調(diào)控細(xì)胞功能進(jìn)而影響排斥反應(yīng)的發(fā)生。據(jù)此我們前期通過小鼠雙向淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)實驗已經(jīng)證實降低ADAR1的表達(dá)能夠抑制淋巴細(xì)胞的增殖，本實驗借助排斥反應(yīng)模型即雙向淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)

3、，通過ADAR1特異siRNA作用，抑制ADAR1的表達(dá)，觀察淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期各期的變化，以及細(xì)胞凋亡的差異。進(jìn)一步揭示ADAR1影響淋巴細(xì)胞增殖的機(jī)制。
　　目的：探討RNA編輯酶ADAR1的表達(dá)受抑制后，小鼠淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的變化。
　　方法：用電轉(zhuǎn)法將ADAR1特異性siRNA轉(zhuǎn)入到處于混合培養(yǎng)的小鼠淋巴細(xì)胞中，培養(yǎng)48h，用RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率；而后用流式細(xì)胞儀檢測，觀察細(xì)胞的周期和凋亡變化；最后通

4、過RT-PCR檢驗周期蛋白E（cyclinE）基因和周期蛋白A1（cyclinA1）基因表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染ADAR1特異性siRNA48h后，小鼠淋巴細(xì)胞G1期細(xì)胞量增加，S期細(xì)胞量減少，G2細(xì)胞量保持恒定。另外，cyclinE基因的表達(dá)量降低而cyclinA1基因表達(dá)保持恒定。
　　結(jié)論：處于經(jīng)典混合培養(yǎng)體系下的小鼠淋巴細(xì)胞，在其RNA編輯酶ADAR1受到特異siRNA抑制后，小鼠淋巴細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，發(fā)