8-Cl-Ado對乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞的增殖抑制作用及其與ADAR1蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　探討8-氯腺苷（8-chloro-adenosine,8-Cl-Ado）對乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響，及其與RNA編輯酶1（adenosine deaminases acting on RNA1,ADAR1）蛋白的相關(guān)性。
　　方法：
　　通過蛋白免疫印跡法（western blotting,WB）檢測人乳腺癌癌組織、癌旁組織及不同乳腺癌細(xì)胞系中ADAR1的表達(dá)情況；

2、通過MTT法檢測不同濃度的8-Cl-Ado（0、1、2、4、6、8、10、20μmol/L）作用乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞48 h后對細(xì)胞活力的影響；通過WB檢測不同濃度的8-Cl-Ado（0、2、4、6、8、10、20μmol/L）處理乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞48 h后ADAR1蛋白的表達(dá)情況；乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染ADAR1-p110和ADAR1-p150質(zhì)粒后，加10μmol/L的8-Cl-Ado

3、處理0、48 h，通過MTT法檢測乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞各轉(zhuǎn)染組的48 h抑制率；10μmol/L的8-Cl-Ado處理乳腺癌MDA-MB-231和 SK-BR-3細(xì)胞不同時(shí)間后，通過流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometre,FCM）檢測細(xì)胞周期的變化以及WB檢測細(xì)胞中ADAR1、P53、P21和Cyclin D1蛋白的表達(dá)情況；乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染ADAR1-p110和ADAR1-p150質(zhì)粒后，WB檢測ADAR1、

4、P53、P21和Cyclin D1蛋白的表達(dá)情況；乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染野生型ADAR1-p110質(zhì)粒、ADAR1-p150質(zhì)粒和突變型ADAR1-△E/A質(zhì)粒、ADAR1-△R質(zhì)粒以及pCMV空載質(zhì)粒，加10μmol/L的8-Cl-Ado處理0、24、48 h，通過MTT法檢測各質(zhì)粒組的抑制率；乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染各質(zhì)粒，加10μmol/L的8-Cl-Ado處理48 h，通過FCM檢測細(xì)胞周期G1期百分比的變化，以及通過傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測各質(zhì)粒組遷移

5、率。
　　結(jié)果：
　　1.ADAR1蛋白的表達(dá)量在人乳腺癌癌組織中明顯比癌旁組織高；ADAR1蛋白在人乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞中表達(dá)相對較高；
　　2.10μmol/L的8-Cl-Ado能明顯抑制乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞活力；ADAR1蛋白表達(dá)量隨8-Cl-Ado濃度的增加而降低；轉(zhuǎn)染ADAR1-p110和ADAR1-p150質(zhì)粒后，8-Cl-Ado對乳腺癌細(xì)胞的抑制率明顯降

6、低；
　　3.10μmol/L的8-Cl-Ado處理乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3細(xì)胞不同時(shí)間后，細(xì)胞周期G1期百分比隨時(shí)間增加逐漸升高，細(xì)胞內(nèi)P53、P21蛋白表達(dá)也逐漸升高，ADAR1、Cyclin D1蛋白表達(dá)逐漸降低；轉(zhuǎn)染ADAR1-p110和ADAR1-p150質(zhì)粒后，P53、P21蛋白表達(dá)降低，ADAR1、Cyclin D1蛋白表達(dá)升高；
　　4.與空白對照組和pCMV空載組相比，野生型ADAR1質(zhì)粒

7、組和突變型ADAR1-△E/A組的增殖抑制率及G1期百分比明顯降低，突變型ADAR1-△R質(zhì)粒無明顯差異；與空白對照組和pCMV空載組相比，野生型ADAR1質(zhì)粒組和突變型ADAR1-△E/A組遷移率明顯升高，突變型ADAR1-△R質(zhì)粒無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.ADAR1蛋白在人乳腺癌組織與人乳腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)，表明人乳腺癌的發(fā)生發(fā)展可能與ADAR1蛋白密切相關(guān)。
　　2.10μmol/L的8-Cl-Ado可能