熊果酸對乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究熊果酸(UrsolicAcid，UA)對人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞增殖和凋亡的影響，結(jié)合人體乳腺癌組織凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測，探討其作用機(jī)制，為UA的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法：采用四氮唑藍(lán)(methylthiazolyltetrazolium，MTT)比色法觀察UA對SK-BR-3細(xì)胞增殖的影響；光鏡、Hoechst33258熒光染色及電子顯微鏡觀察經(jīng)UA處理后SK-BR-3細(xì)胞的形態(tài)變化；DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察U

2、A作用后SK-BR-3細(xì)胞凋亡的生化特征；流式細(xì)胞儀檢測UA對SK-BR-3細(xì)胞周期和凋亡率的影響。應(yīng)用用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測ER(-)、HER2(+)的人體乳腺癌組織中凋亡相關(guān)蛋白COX-2、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。RT-PCR技術(shù)進(jìn)一步檢測UA作用下SK-BR-3細(xì)胞中COX-2、Bax、Bcl-2mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果：UA對SK-BR-3細(xì)胞的增殖具有顯著抑制作用(P<0.05)，并呈時間和劑量依賴趨勢，U

3、A作用于SK-BR-3細(xì)胞24h、48h、72h的IC50(50％inhibitoryconcentration，半數(shù)抑制濃度)分別為〉60μmol/l、31.54μmol/l、24.16μmol/l；經(jīng)UA處理后的SK-BR-3細(xì)胞可呈現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變：胞核皺縮，染色質(zhì)濃集；DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示凋亡特征性梯狀條帶；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示10-30μmol/L的UA作用48h使SK-BR-3細(xì)胞阻滯在G0/G1期(P<0.

4、05)；UA作用48h后能使乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞中COX-2、Bcl-2mRNA表達(dá)明顯減少(P<0.05)，使Bcl-2/Bax比值減小(P<0.05)，而對BaxmRNA的表達(dá)未見明顯影響；COX-2、Bcl-2、Bax蛋白在ER(-)，HER2(+)的乳腺癌組織中的表達(dá)陽性率分別為86.67％(26/30)，63.33％(19/30)，56.67％(17/30)，COX-2與Bax表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.37864，P<0