漢防己甲素衍生物對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討漢防己甲素衍生物HL-42和HL-49對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖、克隆形成能力和凋亡的影響及其可能的作用機(jī)制，并初步研究HL-49聯(lián)合三種化療藥物對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響。
　　方法:
　　采用不同濃度的HL-42和HL-49分別作用MDA-MB-231細(xì)胞后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞克隆形成的影響；2和10μmol/L的HL-42和HL-4

2、9分別作用于MDA-MB-231細(xì)胞24 h后，應(yīng)用FCM法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，半定量RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中Bloom綜合征解旋酶（bloom’s syndrome helicase，BLM）、人乳腺癌易感基因1（Breast cancer susceptibility gene1，BRCA1）和同源重組修復(fù)的關(guān)鍵酶Rad51 mRNA的表達(dá)水平，蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞中BLM、BRCA1和Rad51蛋白的表達(dá)水平；1和2μmol/L的

3、HL-49聯(lián)合不同濃度的順鉑（DDP）、阿霉素（ADM）和紫杉醇（TAX）分別作用于MDA-MB-231細(xì)胞48 h后，采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。
　　結(jié)果：
　　1.25～10μmol/L的HL-42和HL-49處理24、48和72 h后，MDA-MB-231細(xì)胞的增殖受到抑制，呈時(shí)間和濃度依賴性（P值均＜0.05），HL-42作用于MDA-MB-231細(xì)胞24、48和72 h的半數(shù)抑制濃度（50％ concen

4、tration of inhibition，IC50）分別為（8.27±0.27）、（3.92±0.39）和（2.72±0.14）μmol/L；相應(yīng)的HL-49的IC50分別為（5.30±0.45）、（3.19±0.32）和（1.64±0.12）μmol/L;而陽(yáng)性對(duì)照漢防己甲素的IC50分別為（23.61±2.02）、（14.85±0.56）和（12.39±0.92）μmol/L；陽(yáng)性對(duì)照順鉑的IC50則為（61.96±3.83）、（

5、29.08±4.11）和（16.19±2.53）μmol/L。0.2、0.5、1和5μmol/L的HL-42和HL-49均可抑制MDA-MB-231細(xì)胞克隆的形成（P值均＜0.001）。2和10μmol/L的HL-42和HL-49均可誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡，且有濃度依賴性（P值均＜0.05）。2μmol/L的HL-42處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中的Rad51 mRNA及蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P值均＞0.05），

6、10μmol/L的HL-42處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中的Rad51 mRNA及蛋白表達(dá)水平下調(diào)（P值均＜0.05）；2和10μmol/L的HL-42處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中BLM和BRCA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P值均＞0.05）。2μmol/L的HL-49處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中的BRCA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P值均＞0.05），10μmol/L的HL-

7、49處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中的BRCA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平下調(diào)（P值均＜0.01）；2和10μmol/L的HL-49處理24 h后，MDA-MB-231細(xì)胞中的BLM、Rad51 mRNA及蛋白表達(dá)水平下調(diào)（P值均＜0.01）。HL-49分別聯(lián)合DDP、ADM和TAX對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用均高于單藥給藥組(P值均＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　漢防己甲素衍生物HL-42和HL-49可明顯