HER4異構(gòu)體及其配體NRG1的異構(gòu)體與人結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是全世界范圍內(nèi)人類最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在男性和女性中都居于全世界第三，是西方國家癌癥致死的主要原因，居于第二位。據(jù)報道，20％-25％的結(jié)直腸癌病人在確診時已發(fā)生同時性轉(zhuǎn)移，而且許多Ⅲ期的病人在確診五年內(nèi)會發(fā)生復(fù)發(fā)。目前用于治療結(jié)直腸癌的主流藥物包括5-Fu、卡培他濱、奧沙利鉑、伊立替康、以血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)為靶點的貝伐單抗和以表皮生長因子受體(EGFR)為靶點的西妥昔單抗等，這些藥物可以單用或者聯(lián)合用于一線

2、或者二線治療。但是因為化療、放療、靶向藥物的毒副反應(yīng)以及耐藥的產(chǎn)生限制了這些治療的效果。因此，探討結(jié)直腸癌致病的分子機制將利于結(jié)直腸癌研發(fā)新藥和個體化治療。
　　HER家族其實包括七個（而不是四個）成員:HER1(EGFR/ErbB1)，HER2(ErbB2/Neu)，HER3(ErbB3),四個不同的HER4異構(gòu)體(JM-a，JM-b，CYT1，CYT2)。HER家族在許多正常組織和癌組織表達。EGFR和HER2是已知的致癌基因

3、，已經(jīng)被美國FDA批準用于結(jié)直腸癌靶向治療的有靶向EGFR(HER1)的西妥昔單抗，HER2的靶向治療不僅在HER2陽性的乳腺癌中取得顯著成果，近些年，更推廣到HER2陽性的胃癌治療中。HER3的過表達、突變與惡性腫瘤的發(fā)生和進展以及較差的臨床預(yù)后相關(guān)。然而關(guān)于HER4在結(jié)直腸癌中的研究尚少。有文獻報道，細胞膜上HER4蛋白的表達可以提示結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但也有研究表明，HER4蛋白的表達與結(jié)直腸患者的無病生存期無相關(guān)性。HER4

4、經(jīng)可變剪接形成四種異構(gòu)體，根據(jù)HER4細胞外區(qū)域的不同可分為JM-a、JM-b，根據(jù)其細胞內(nèi)區(qū)域的不同可以分為CYT1、CYT2。這些研究并未檢測HER4異構(gòu)體的表達及功能，這可能是導(dǎo)致HER4在癌癥中作用不一致的原因。
　　現(xiàn)已知道HER4的配體有七種，其中NRG1（神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1）是HER4的高親和的配體，NRG1參與人體許多生理以及病理活動（包括結(jié)直腸癌）中細胞之間的信號反應(yīng)。NRG1經(jīng)過可變剪接產(chǎn)生至少30種NRG1異構(gòu)

5、體，根據(jù)氨基端的不同可以分成至少三大類型(NRG1Ⅰ～Ⅲ)。NRG1Ⅰ型和Ⅱ型在細胞膜表面被金屬蛋白酶和ADAM17、19以及α分泌酶水解。NRG1Ⅲ含有一個半胱氨酸富集區(qū)，該區(qū)可以連接并激活HER3、HER4。據(jù)報道，骨髓源性間充質(zhì)細胞可以通過旁分泌NRG1/HER3信號途徑促進CRC進展。而且許多研究表明，NRG1-HER4信號通路在神經(jīng)和心臟系統(tǒng)以及腫瘤中發(fā)揮重要作用。
　　本研究旨在探討HER4和NRG1異構(gòu)體在結(jié)直腸癌中

6、的表達，并分析兩者與人結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。
　　目的:
　　1、檢測HER4異構(gòu)體JM-a、JM-b、CYT-1、CYT-2與NRG1異構(gòu)體NRG1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ在結(jié)直腸癌中的表達。
　　2、探討HER4異構(gòu)體以及NRG1異構(gòu)體在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　3、分析HER4異構(gòu)體以及NRG1異構(gòu)體之間的相關(guān)性
　　方法:
　　1、病人的選擇以及標本采集
　　收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二

7、科2013年11月至2014年8月的38例結(jié)直腸癌手術(shù)病人的新鮮冰凍的組織樣本，總共76例（其中結(jié)直腸癌組織38例，與其配對的正常腸組織38例）。38例病人均為原發(fā)性結(jié)直腸癌的第一次手術(shù)，接受同一位術(shù)者的手術(shù)治療，而且病人術(shù)前均未接受放、化療。術(shù)前經(jīng)腸鏡活檢取病理確診為結(jié)直腸癌。每例標本分別取自原發(fā)結(jié)直腸癌組織(C)，癌旁5cm的正常結(jié)直腸組織(N)。
　　2、RNA提取以及熒光定量PCR
　　對38例結(jié)直腸癌組織及其配對的

8、癌旁組織中JM-a、JM-b、CYT1、CYT2、NRG1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ進行熒光定量PCR分析。以β-actin作為內(nèi)參計算目的基因mRNA的相對表達量（使用△△Ct法計算mRNA的相對表達量），并且以該相對表達量進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　3、使用Spearman秩和相關(guān)法分析HER4異構(gòu)體CYT1、CYT2與NRG1Ⅲ之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1、HER4以及NRG1異構(gòu)體在結(jié)直

9、腸癌組織及其癌旁組織中的表達。
　　經(jīng)過熒光定量RT-PCR分析，CYT1(P=0.002)、CYT2（P=0.002）、NRG1Ⅲ(P=0.000)在結(jié)直腸癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織(P＜0.05)。JM-a、JM-b、NRG1Ⅰ、Ⅱ在癌組織與正常組織中的表達無明顯差異。
　　2、CYT1、CYT2以及NRG1Ⅲ與結(jié)直腸癌臨床病理資料的關(guān)系
　　在38例結(jié)直腸癌患者的癌組織中，CYT1的表達與腫瘤浸潤深度(T

10、)(P=0.027)、TNM分期(P=0.033)密切相關(guān)。CYT1在T2-3期、T4期腫瘤中相對表達量的中位數(shù)分別為5.36和39.48。CYT1在Ⅰ期和Ⅱ期的表達有差異(P＜0.05），中位數(shù)分別為0.42和10.25，而在Ⅱ期和Ⅲ期之間無差異（P＞0.05）。CYT2與T（P=0.018）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.015）、TNM（P=0.038）密切相關(guān)，CYT2在T2-3和T4組的相對表達量的中位數(shù)分別為5.36和39.48，在淋

11、巴結(jié)陰性組和陽性組分別為5.36和50.59，在Ⅰ、Ⅱ期無差異，Ⅲ期（中位數(shù)=50.59）的表達明顯高于Ⅰ期（中位數(shù)=5.90）、Ⅱ期（中位數(shù)=3.34），P均＜0.05。
　　NRG1Ⅲ在淋巴結(jié)陽性組中的表達明顯高于淋巴結(jié)陰性組（中位數(shù)分別為2.00和0.96，P=0.033）。NRG1Ⅲ與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、CEA水平均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3、使用Spearman秩和相關(guān)法分析CYT1、CYT2、NRG1