人ITSN2基因新剪接異構(gòu)體的克隆和鑒定.pdf

1、學(xué)校代碼!Q5壘2密級學(xué)號200714020039人ITSN2基因新剪接異構(gòu)體的克隆和鑒定Cloneandidentificationandofanewisoformofgene，指導(dǎo)教師姓名、職稱堂焦整撞魚墨鹽塾撞湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室二零一零年五月摘要Intersectin家族成員ITSNl和ITSN2，都是有廣泛表達(dá)的蛋白。它們都有2個EH結(jié)構(gòu)域、一個CC結(jié)構(gòu)域和5個連續(xù)的SH3結(jié)構(gòu)域，通過選擇性剪接具有2個主要的轉(zhuǎn)錄本

2、。一個短的轉(zhuǎn)錄本S和一個在C端依次增加了編碼DH、PH和C2結(jié)構(gòu)域的長轉(zhuǎn)錄本L。相對于ITSNl，ITSN2在組織表達(dá)中更有普遍性。研究表明ITSN主要在網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞過程中起到支架蛋白的作用。TNFAIPI是一個受腫瘤壞死因子Q(TNFQ)誘導(dǎo)表達(dá)的即早基因，為了研究TNFAIPI的相互作用蛋白，我們以TNFAIPI為誘餌蛋白，使用酵母雙雜交技術(shù)篩選人的胚胎腦庫，結(jié)果篩選出了ITSN2基因的一段，主要包含EH2和CC兩個結(jié)構(gòu)域。為

3、了進(jìn)一步研究它們之間的相互作用，我們首先克隆了ITSN2。先克隆前、中、后三部分再連接起來得到ITSN2全長，測序結(jié)果顯示相對于ITSN2L缺失了了17號外顯子和36號外顯子的一部分。我們將這一新剪切體命名為ITSN2M。分析顯示ITSN2一M的前期讀碼結(jié)構(gòu)沒有改變，但在36號缺失后產(chǎn)生了一個終止密碼子。因?yàn)?7號外顯子的缺失，位于中間的CC結(jié)構(gòu)域被破壞；而36號外顯子缺失導(dǎo)致翻譯終止，影響了PH和C2結(jié)構(gòu)域。說明這種不同于ITSN2一