煙酸促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)在體和離體研究.pdf

1、背景和目的： 流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，人群中血漿高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)水平與冠心病發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，提示HDL具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。長(zhǎng)期以來(lái)，用來(lái)解釋HDL這一抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制主要是HDL參與膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)過(guò)程。RCT是機(jī)體排出過(guò)多膽固醇的唯一途徑，也是目前認(rèn)為機(jī)體內(nèi)對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的主要機(jī)制之一。煙酸具有全面而獨(dú)特的調(diào)脂作用，是最有效的升高HDL-C的藥物。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)煙酸能減緩頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度即動(dòng)脈粥樣

2、硬化發(fā)展進(jìn)程，我們推測(cè)其中重要機(jī)制是煙酸促進(jìn)體內(nèi)的RCT，但具體作用機(jī)制不明。已知有三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體超家族(ABCA1、ABCG1、ABCG5、ABCG8等)和細(xì)胞色素P450家族的膽固醇70【羥化酶(CYP7α)等多種蛋白、受體、轉(zhuǎn)運(yùn)體參與RCT，并受核受體家族的成員肝X受體(LXRα)及其上游基因過(guò)氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)的調(diào)節(jié)。以往有研究報(bào)道煙酸可促進(jìn)ABCA1介導(dǎo)的細(xì)胞膽固醇流出，然而此類研究均為體外研究，未

3、能系統(tǒng)反應(yīng)體內(nèi)煙酸對(duì)RCT的影響，有關(guān)煙酸對(duì)RCT進(jìn)程其他轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響也未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究采用本中心已建立的替代方法測(cè)定煙酸作用后巨噬細(xì)胞體內(nèi)、體外RCT的效率，并深入探討其機(jī)制，從而了解煙酸對(duì)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。 方法： 以煙酸(0、1％，w/w)干預(yù)4周的C57BL/6J小鼠為模型，分別腹腔注射經(jīng)已?；兔芏戎鞍?Ac-LDL)荷脂與3H-膽固醇標(biāo)記的巨噬細(xì)胞懸液，用液閃計(jì)數(shù)儀測(cè)定血清、肝臟、糞便中3H-膽固醇的

4、含量；以不同劑量(0、0.2、1.0、5.0mM)煙酸干預(yù)巨噬細(xì)胞，HDL介導(dǎo)，測(cè)定細(xì)胞膽固醇流出；以RT-PCR方法檢測(cè)肝組織CYP7α，肝臟和小腸ABCG5、LXRα，巨噬細(xì)胞SR-BI、ABCA1、ABCG1、LXRα、PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)；再用Western-blot方法檢測(cè)肝臟和小腸的ABCG5、LXRα，巨噬細(xì)胞ABCG1、LXRα的蛋白水平表達(dá)。 結(jié)果： 1.煙酸明顯降低小鼠血清總膽固醇(TC)和低密度

5、脂蛋白.膽固醇(LDL-C)，降低幅度分別為40和63％(P<0.01)；輕度降低血清甘油三酯(TG) (P<0.05)；升高高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)14％。 2.與對(duì)照組比較，煙酸組小鼠血清中3H-膽固醇的分布降低20％(P<0.05)，而肝臟及糞便中3H含量卻明顯增多，增幅分別為19％和21％(P<0.05)。 3.煙酸分別增加肝臟和小腸組織中ABCG5 mRNA表達(dá)1.3倍和1.7倍(P<0.05)；上調(diào)

6、CYP7a的表達(dá)125.9％(P<0.05)；分別增加肝臟和小腸LXRa mRNA的表達(dá)1.2倍和2.1倍(P<0.05)。 4.對(duì)照組肝臟ABCG5和LXRa的蛋白質(zhì)水平基本沒(méi)有表達(dá)，但煙酸干預(yù)后兩種組織的ABCG5和LXRa蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，分別增加了40和30倍(P<0.01)。 5.煙酸可呈濃度依賴性增加巨噬細(xì)胞中HDL介導(dǎo)的膽固醇流出。0、0.2、1.0和5.0mM濃度的煙酸干預(yù)時(shí)，膽固醇流出率分別為2.35±

7、0.35，4.58±0.16，7.24±0.29，13.26±0.43。 6.SR-BI在巨噬細(xì)胞中有較高表達(dá)，但與對(duì)照組(0.724-0.08)比較，煙酸濃度的升高對(duì)SR-BI表達(dá)的影響無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 7.煙酸呈濃度依賴性增加ABCA1、ABCG1、LXRa和PPARwnRNA的表達(dá)。 8.巨噬細(xì)胞ABCG1和LXRα蛋白表達(dá)與煙酸的濃度呈劑量依賴性增加。 結(jié)論： 1.煙酸降低小

8、鼠血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯，升高高密度脂蛋白膽固醇。 2.煙酸促進(jìn)小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)。 3.煙酸可能通過(guò)上調(diào)體內(nèi)LXRα，從而刺激ABCG5、CYP7α表達(dá)來(lái)發(fā)揮促進(jìn)小鼠體內(nèi)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用。 4.煙酸可劑量依賴性促進(jìn)由ABCA1和ABCG1介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇外流，可能與其上調(diào)PPARγ和LXRα表達(dá)有關(guān)。 5.煙酸促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇流出機(jī)制可能與細(xì)胞膜SR-BI的表達(dá)量無(wú)關(guān)