苯扎貝特促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)和體外研究.pdf

1、大量臨床流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，人群中血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平與冠心病發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，提示HDL具有抗動脈粥樣硬化作用。膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)是機(jī)體排出過多膽固醇的唯一途徑，也是HDL抗動脈粥樣硬化的重要機(jī)制之一。RCT指的是將外周組織細(xì)胞(包括巨噬細(xì)胞)游離膽固醇通過脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，再通過肝臟排泄的過程。巨噬細(xì)胞是動脈粥樣硬化病變的主要細(xì)胞成分，巨噬細(xì)胞過度荷脂轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，沉積于動脈壁形成早期的粥樣斑塊。因此，巨噬細(xì)胞

2、RCT對動脈粥樣硬化的發(fā)展起著最為關(guān)鍵的作用。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體超家族(ABCA1、ABCG1、ABCG5、ABCG8等)、B族清道夫受體I(SR-BI)、膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)等多種蛋白、受體、轉(zhuǎn)運(yùn)體參與RCT，并受肝X受體(LXRα)的調(diào)節(jié)。苯扎貝特是目前臨床上常用的調(diào)血脂藥物，可以明顯降低甘油三酯(TG)和升高HDL-C。大規(guī)模臨床研究證實苯扎貝特能有效延緩動脈斑塊的形成，降低冠心病患者的臨床終點(diǎn)事件發(fā)生的危險性。苯

3、扎貝特抗動脈粥樣硬化的機(jī)制除了其調(diào)節(jié)血脂如降低TG和升高HDL-C外，可能還具有調(diào)脂外的作用如抗炎、抗凝作用。對于RCT的作用的研究，苯扎貝特僅限于對RCT中轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白如ABCA1、ABCG5的影響。然而，長期以來缺少對在體RCT的評價方法。本研究在Rader實驗室的方法基礎(chǔ)上建立了替代方法，觀察苯扎貝特對巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)、體外的影響，并探討其可能的機(jī)制。 目的： 觀察苯扎貝特干預(yù)后小鼠血脂濃度變化，以及血清、肝臟

4、及糞便中3H-膽固醇占經(jīng)腹腔注射3H-膽固醇總量的百分比。研究苯扎貝特對小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞RCT的影響，苯扎貝特干預(yù)后小鼠血清及苯扎貝特對巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的影響，探討苯扎貝特調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞RCT的機(jī)制。 方法： 以苯扎貝特(0.1％、0.25％、0.5％w/w)干預(yù)4周的C57BL/6J小鼠為模型，分別腹腔注射經(jīng)乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)荷脂與3H-膽固醇標(biāo)記的巨噬細(xì)胞懸液，用液閃計數(shù)儀測定血清、肝臟、糞便中3H

5、-膽固醇的含量；收集0.25％苯扎貝特組小鼠血清孵育不同劑量的苯扎貝特(0、50、100、200μM)干預(yù)的RAW264.7巨噬細(xì)胞，測定細(xì)胞膽固醇流出；以RT-PCR方法檢測肝組織CYP7A1、SR-BImRNA，肝臟和小腸ABCG5、LXRamRNA，巨噬細(xì)胞SR-BI、ABCA1、ABCG1、LXRαmRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)；再用Western-blot方法檢測肝臟和小腸的ABCG5、LXRa，巨噬細(xì)胞ABCG1、LXRα的蛋白水平

6、表達(dá)。 結(jié)果： 1.小鼠經(jīng)苯扎貝特(0.1％、0.25％、0.5％)干預(yù)4周后，血HDL-C升高，TG降低，這些作用呈劑量相關(guān)性趨勢。0.5％苯扎貝特組HDL-C水平較對照組明顯增高(P<0.01)，增幅為26.4％；TG水平較對照組明顯降低(P<0.01)，降幅為34％。 2.采用不同劑量苯扎貝特(0.1％、0.25％、0.5％)干預(yù)小鼠，與對照組相比，血3H-膽固醇含量顯著增加，增幅分別為100％、131％、

7、110％；肝臟3H-膽固醇含量也顯著增加，增幅分別為86.4％、52.3％、51.6％；糞便3H-膽固醇含量同樣顯著增加，增幅分別為110％、140％、160％。 3.與對照組比較，苯扎貝特干預(yù)后的小鼠血清介導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出明顯增加(P<0.05)。 4.苯扎貝特(0、50、100、200μM)呈劑量依賴性地增加血清誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇流出率。 5.體外試驗顯示，苯扎貝特(0、50、100、200μM)呈劑

8、量依賴性地上調(diào)巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1、SR-BImRNA表達(dá)及ABCG1蛋白的表達(dá)量；并呈劑量依賴性地增加巨噬細(xì)胞LXRαmRNA及蛋白的表達(dá)量。 6.小鼠經(jīng)苯扎貝特(0.1％，0.25％，0.5％)干預(yù)后，其肝臟SR-BI mRNA表達(dá)較對照組明顯增加(P<0.05)。 7.不同劑量苯扎貝特(0.1％，0.25％，0.5％)干預(yù)組小鼠肝臟、小腸ABCG5、LXRα mRNA表達(dá)與蛋白質(zhì)表達(dá)較對照組明顯增高(P<

9、0.05)。 8.各苯扎貝特(0.1％，0.25％，0.5％)干預(yù)組小鼠肝臟CYP7A1mRNA表達(dá)較對照組明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1.苯扎貝特具有以下作用： (1)降低小鼠血清TG，升高HDL-C。 (2)促進(jìn)小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞相關(guān)的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)。 (3)促進(jìn)體外培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇流出。 2.苯扎貝特促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞RCT的機(jī)制： (1)通過增加ABCA1、