α-菠菜甾醇對小鼠小腸P糖蛋白和寡肽轉(zhuǎn)運體PepT1藥物轉(zhuǎn)運體的影響研究.pdf

1、目的:本實驗在中藥引經(jīng)的理論指導(dǎo)下，結(jié)合本實驗室前期對桔梗引經(jīng)作用的研究方法，首先從桔梗各有效成分中篩選出化學(xué)結(jié)構(gòu)清晰的α-菠菜甾醇(α-spinasterol)作為研究物質(zhì)，然后選用酒石酸泰樂菌素(Tylosin tartrate)為底藥，利用免疫組化，熒光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR)和免疫蛋白印跡(Western blotting，WB)等研究方法，通過

2、研究α-菠菜甾醇對小鼠小腸段外排型藥物轉(zhuǎn)運體P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)和攝取型藥物轉(zhuǎn)運體寡肽轉(zhuǎn)運體1（oligopeptide transporter，PepT1）表達(dá)的影響，初步探討在吸收環(huán)節(jié)上使桔梗發(fā)揮“載藥上行”作用的機理，為進(jìn)一步研究引經(jīng)作用機制等實驗提供基礎(chǔ)，同時為驗證引經(jīng)理論的科學(xué)性。
　　方法:144只健康昆明小鼠，隨機分為4個組，每組36只，雌雄各半。Ⅰ組:單劑量一次灌服α-菠菜甾醇[12.

3、5mg/(kg·b·w)];Ⅱ組:單劑量一次同時灌服α-菠菜甾醇[12.5mg/(kg·b·w)]與酒石酸泰樂菌素[600mg/(kg·b·w)];Ⅲ組:單劑量一次灌服酒石酸泰樂菌素[600mg/(kg·b·w)];Ⅳ組:單劑量一次灌服生理鹽水。每組按0.2mL·10g-1BW的劑量共灌胃5天，分別在1，3，5天后處死一批采樣。采用免疫組化，熒光定量PCR和免疫蛋白印跡的方法測定1，3，5天的小鼠腸道上P-gp和PepT1的表達(dá)的變化。

4、
　　結(jié)果:從三個方法的結(jié)果來看:Ⅰ組（α-菠菜甾醇組）和Ⅱ組（混合組）相對于Ⅳ組（對照組）外排型藥物轉(zhuǎn)運體P-gp表達(dá)減少或強度減弱;而攝取型藥物轉(zhuǎn)運體PepT1表達(dá)增多或強度增強;而Ⅲ組（酒石酸泰樂菌素組）的外排型藥物轉(zhuǎn)運體P-gP表達(dá)增多或強度增強;攝取型藥物轉(zhuǎn)運體PepT1表達(dá)減少或強度減弱，且都隨著用藥時間的延長差異性越來越顯著(P＜0.01)。其中免疫組化結(jié)果表明，P-gp在十二指腸的變化差異較空腸和回腸更加明顯，而P

5、epT1在空腸的變化比十二指腸和回腸更為顯著;熒光定量PCR和免疫印跡結(jié)果顯示，P-gp在各腸段的表達(dá)是從近端到遠(yuǎn)端逐漸遞增，而PepT1在各腸段的表達(dá)在十二指腸最多，在空腸和回腸依次遞減。
　　結(jié)論:①α-菠菜甾醇具有抑制藥物轉(zhuǎn)運體P-gp表達(dá)和促進(jìn)藥物轉(zhuǎn)運體PepT1表達(dá)的作用。②酒石酸泰樂菌素具有促進(jìn)P-gp表達(dá)和抑制PepT1表達(dá)的作用。③桔?！耙?jīng)”在吸收環(huán)節(jié)上的作用機理之一是作用于腸道上的藥物轉(zhuǎn)運體。④酒石酸泰樂菌素和