靶向寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PEPT1)的新型結(jié)構(gòu)載體前藥研究.pdf

1、口服給藥方便、經(jīng)濟(jì)，病患的依從性好，一直是最理想的給藥途徑，但口服生物利用度不高往往是造成許多藥物無(wú)法口服給藥的重要原因。在提高口服生物利用度的眾多策略中，靶向轉(zhuǎn)運(yùn)體，尤其是靶向寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（PEPT1）的載體前藥研究，一直是國(guó)內(nèi)外近十年來(lái)的研究熱點(diǎn)。
　　作為膜蛋白的PEPT1，3D晶體結(jié)構(gòu)至今未破解，基于靶標(biāo)PEPT1結(jié)構(gòu)的理性化設(shè)計(jì)難以實(shí)現(xiàn)，因此，目前研究思路一般集中在母體化合物的羥基位引入氨基酸修飾，形成氨基酸酯而做的PE

2、PT1底物改造，同一母體化合物的二肽修飾效果優(yōu)于單個(gè)氨基酸修飾。一般認(rèn)為，肽鍵、羧基末端、氨基末端等是修飾后前藥化合物被PEPT1識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)的必要結(jié)構(gòu)特征。而在母體化合物的非羥基位修飾，卻罕見文獻(xiàn)報(bào)道。
　　然而在后續(xù)研究中證實(shí)，除氨基末端以外，肽鍵和羧基末端并非PEPT1識(shí)別的必要結(jié)構(gòu)，因此，PEPT1的底物模型特征還難有定論。
　　我們通過(guò)對(duì)文獻(xiàn)17個(gè)頭孢菌素類化合物在Caco-2細(xì)胞單層膜的透過(guò)系數(shù)的數(shù)據(jù)分析，認(rèn)為末端

3、氨基也不是PEPT1底物識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)所必不可少的特征結(jié)構(gòu)。因此，基于PEPT1底物的可能設(shè)計(jì)趨向以及我們對(duì)底物特征結(jié)構(gòu)的分析和推測(cè)，在本論文研究中，我們嘗試在母體化合物齊多夫定的非羥基位引入二肽修飾，同時(shí)舍棄氨基末端，設(shè)計(jì)一個(gè)具有新型結(jié)構(gòu)特征的小型化合物庫(kù)，并通過(guò)PEPT1親和性篩選研究和體內(nèi)外轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收研究，來(lái)證實(shí)PEPT1對(duì)該結(jié)構(gòu)特征的化合物的識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　本論文結(jié)合點(diǎn)擊化學(xué)（Click Chemistry）與固相合成技術(shù)，

4、建立簡(jiǎn)便、高效的合成方法，完成了包含61個(gè)化合物庫(kù)的合成，并對(duì)全庫(kù)化合物進(jìn)行了收率、HPLC、MS以及1H NMR的表征、30％化合物的高分辨質(zhì)譜表征，以及15%化合物的全譜表征，建立了一個(gè)具有新型結(jié)構(gòu)的二肽修飾化合物庫(kù)。并且，通過(guò)寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PEPT1已知底物頭孢氨芐的競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)，完成了化合物庫(kù)的PEPT1親和性研究，部分二肽修飾化合物對(duì)頭孢氨芐的細(xì)胞攝取的抑制率達(dá)到80以上；進(jìn)一步地，通過(guò)代表性化合物在PEPT1高表達(dá)的Hela

5、細(xì)胞模型上的體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)，以及在體大鼠腸灌流實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)PEPT1參與并介導(dǎo)了該類化合物的細(xì)胞攝取和小腸轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。
　　本論文研究的主要結(jié)果：發(fā)現(xiàn)了多個(gè)對(duì)PEPT1具有很高親和性的二肽序列，并未見文獻(xiàn)報(bào)道；首次證實(shí)具有該新型結(jié)構(gòu)的化合物能夠被PEPT1識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)；通過(guò)本論文篩選獲得的高親和性二肽序列修飾，能夠顯著提高其母體化合物的小腸吸收。因此，本論文的研究結(jié)果對(duì)擴(kuò)大靶向PEPT1載體前藥的母體化合物的選擇范圍、二肽修飾的位