新型載體前藥透明質(zhì)酸苯丁酸酯的合成、表征及活性研究.pdf

1、癌癥治療常因藥物缺乏腫瘤細(xì)胞特異識別能力，對人體正常組織傷害較大。腫瘤靶向給藥體系的研究正是為了提高藥物作用的靶向性，增強(qiáng)藥效，降低毒副作用。透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid，HA)是一種天然的糖胺聚糖，具有高度黏彈性、可塑性、非免疫原性、良好的生物相容性及可降解性等優(yōu)良特性，現(xiàn)已成為藥物遞送研究的熱點(diǎn)。HA既可以作為藥物的大分子載體，又可與多種細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合，其中最主要的受體CD44高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面。利用該特性，H

2、A可靶向遞送抗腫瘤藥物至腫瘤組織和細(xì)胞內(nèi)，提高藥物對腫瘤細(xì)胞作用的有效性，減少用藥劑量，降低不良反應(yīng)。除此之外，HA作為載體能夠利用腫瘤組織的高通透性及滯留性，聚集在腫瘤組織中，增強(qiáng)靶向性。苯丁酸(PhenylbutyrateAcid，PBA)是芳香脂肪酸結(jié)構(gòu)化合物，可較為方便地與透明質(zhì)酸雙糖單位上羥基發(fā)生酯化反應(yīng)，適合作為模型藥連接至HA。PBA對腫瘤細(xì)胞株具有廣譜誘導(dǎo)能力，可通過多種調(diào)控方式促使腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化成熟，促進(jìn)白細(xì)胞

3、聚集，改變腫瘤的免疫原性。PBA與載體結(jié)合形成載體前藥，有利于PBA在靶點(diǎn)周圍聚集，在體內(nèi)逐漸釋放，達(dá)到緩釋及靶向給藥作用。
　　本文選用透明質(zhì)酸作為藥物載體，與抗腫瘤藥物苯丁酸酯化結(jié)合，設(shè)計(jì)成新型載體前藥透明質(zhì)酸苯丁酸酯(HA-PB)，主要研究結(jié)果如下。
　　1.本論文首次介紹了新型載體前藥透明質(zhì)酸苯丁酸酯的合成路線，將苯丁酸活化后連接到透明質(zhì)酸6位羥基上，改變反應(yīng)條件得到系列酯化產(chǎn)物，最終優(yōu)化反應(yīng)條件得到具有良好水溶性的

4、140404、140426、140428批次HA-PB。
　　2.通過紅外、核磁、紫外對HA-PB進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。在紅外圖譜中，HA-PB在1735 cm-1處出現(xiàn)新的酯鍵吸收峰，表明反應(yīng)有酯鍵生成;核磁結(jié)果中，對140404、140426、140428批次HA-PB的核磁化學(xué)位移歸屬，確定由PB引入的苯環(huán)區(qū)域在低場δ7.29 ppm出現(xiàn)，并分別對圖中PB苯環(huán)和HA酰胺甲基積分，計(jì)算得到三個產(chǎn)物的酯化度分別為13.2％、21.8％和

5、34.4％。
　　3.建立HPLC方法對合成產(chǎn)物HA-PB進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析。通過保留時間對照法對有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性，并分別作出有關(guān)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對每個有關(guān)物質(zhì)成分進(jìn)行定量分析，計(jì)算出HA-PB的純度均＞99.0％。然后通過加堿降解法，充分測定HA-PB中PB含量，計(jì)算產(chǎn)物酯化度為17.1％、21.8％、30.3％，與核磁法測出結(jié)果基本一致，具有較高可信度。
　　4.設(shè)置正常組、陰性對照組、陽性對照組、實(shí)驗(yàn)組，觀察加藥培養(yǎng)液作

6、用于小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)后，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，初步觀察發(fā)現(xiàn)抑制能力與酯化度大小成正比關(guān)系。通過MTT比色法考察HA-PB對小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)的體外抑制活性。結(jié)果表明，140404、140426、140428批次HA-PB對B16細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為0.199、0.013、0.017 mmol/L（PB當(dāng)量），均低于PB的IC50值1.277 mmol/L。初步判斷HA-PB的癌細(xì)胞抑制作用較原藥PB有了增強(qiáng)。