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文檔簡介
1、透明質酸(hyaluronicacid,HA),又名玻璃酸,是由D-葡糖醛酸(GlcA)和N-乙酰氨基葡糖(GlcNAc)雙糖單位通過交替的β-1,3和β-1,4糖苷鍵連接而成的線性高分子酸性粘多糖。HA是構成細胞外基質(ECM)的主要成分,是皮膚、玻璃體、關節(jié)滑液和軟骨組織的重要成分,具有獨特的理化性質和生物學功能。研究顯示,HA在維持組織完整性以及在感染、損傷、胚胎發(fā)育過程中的組織形成和重塑方面發(fā)揮重要作用。
1934
2、年美國科學家Meyer和Palmer首先從牛眼玻璃體中分離得到HA,隨著人們對HA結構、性質和生理功能研究的不斷深入,其在醫(yī)藥、化妝品、食品等領域的應用越來越廣泛。研究表明,不同相對分子質量(Mr)的HA具有不同甚至截然相反的活性。近年來,國內外研究者對HA降解及其降解產物的研究不斷增多。透明質酸寡糖(oligosaccharidesofhyaluronan,簡稱o-HA)為Mr小于10000Da、單糖殘基數量在2~40之間的HA分子片
3、段,因其在促進傷口愈合、促血管生成、免疫調節(jié)以及抗腫瘤等方面具有十分重要的作用日益受到研究者的重視。o-HA的制備方法主要包括化學降解、酶降解以及生物合成法。其中,酶解制備因反應條件溫和、降解效率高等特點比較適用于o-HA的制備。
本課題重點研究了不飽和透明質酸二糖(unsaturatedhyaluronandisaccharide,△DiHA)的制備純化、結構確證、細胞毒性及相關生物活性。
1、△DiHA的
4、制備
研究了用一種來源于芽孢桿菌的透明質酸裂解酶(hyaluronatelyase)制備△DiHA的方法,并根據此種酶降解的特點探討△DiHA的純化方法。然后,通過對△DiHA樣品紫外光譜、質譜、核磁共振氫譜和碳譜的分析確定了△DiHA端基異構體的結構,隨后討論了硫酸咔唑法和HPLC法測定△DiHA含量的方法。
2、△DiHA的細胞毒性
使用小鼠成纖維細胞(L929)評價了△DiHA的細胞毒性。
5、結果顯示,△DiHA孵育后的L929細胞的增殖速率及細胞形態(tài)較陰性對照均沒有明顯變化,即△DiHA對L929細胞沒有細胞毒性。
3、△DiHA對人臍靜脈血管內皮細胞及人角膜上皮細胞增殖的影響
采用MTT法測定了△DiHA對人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)及人角膜上皮細胞(HCEC)增殖的影響,并使用流式細胞術檢測了△DiHA對HCEC細胞周期及凋亡的影響。結果顯示,△DiHA具有較強的促進HUVEC增殖的活性,
6、并可明顯促進HCEC的增殖,但對HCEC細胞周期及凋亡沒有顯著影響。
4、△DiHA抗氧化活性研究
研究了不同濃度H2O2刺激HCEC對細胞內活性氧(ROS)水平的影響以及△DiHA是否能夠抑制細胞內ROS水平的升高。結果表明,在一定濃度范圍內,細胞內ROS水平隨培養(yǎng)基中H2O2濃度的升高升高,而在培養(yǎng)基中加入不同濃度△DiHA可一定程度降低由H2O2刺激引起的細胞內ROS水平的升高。
本課題主
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