受體介導(dǎo)的腫瘤靶向性透明質(zhì)酸納米藥物載體的研究.pdf

1、本論文以脫氧膽酸為疏水基團(tuán)，制備了疏水修飾的透明質(zhì)酸一脫氧膽酸耦合物，研究了這種兩親性分子在水溶液中的自組裝行為；以阿霉素為模型藥物制備了載藥的透明質(zhì)酸納米粒，研究了其在體外的藥物緩釋效果；以人宮頸癌上皮細(xì)胞系(human epithelioid cervical cancer cell line、HeLa)細(xì)胞為模型細(xì)胞，考察了載藥納米粒的體外腫瘤細(xì)胞殺傷率，并探討了細(xì)胞對(duì)納米粒的吞噬機(jī)制。 利用EDC作為交聯(lián)劑，通過酰胺鍵共

2、價(jià)連接脫氧膽酸(doxycholic aeid，DOCA)到透明質(zhì)酸(hyaluronic acid.HA)上制備HA-DOCA(HD)化學(xué)耦合物，并改變脫氧膽酸與透明質(zhì)酸的反應(yīng)摩爾比制成三種不同取代度的樣品(HD6、HD7、HD9)。利用核磁共振檢測(cè)證明了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)；利用微量滴定法測(cè)定了產(chǎn)物的取代度，每個(gè)HA鏈約含有5.9-9.4個(gè)DOCA分子。通過超聲法制備HD納米粒懸液，利用熒光探針檢測(cè)了納米粒的自聚集性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)HD納米粒的臨界聚

3、集濃度(CAC)隨著取代度的增加而降低，三種樣品的CAC值分別是：0.056mg/ml、0.037mg/ml、0.025mg/ml；納米粒內(nèi)核的疏水性隨取代度的增加而提高；利用熒光淬滅技術(shù)研究了納米粒內(nèi)部疏水簇的交聯(lián)數(shù)量和其顯微結(jié)構(gòu)，疏水微區(qū)的濃度(NDOCA)和聚合物鏈的聚集數(shù)量(Nchain)隨著脫氧膽酸取代度的增加而增加，表明HD納米粒內(nèi)部形成了多個(gè)疏水的內(nèi)核；利用動(dòng)態(tài)激光散射與透射電子顯微鏡技術(shù)對(duì)納米粒的形態(tài)進(jìn)行了表征，納米粒的

4、大小隨取代度增加而減小，三種樣品的平均粒徑分別是：1144nm，447nm，208nm，納米粒近似球形，形態(tài)完整。 利用疏水相互作用，把模型藥物-阿霉素裝載進(jìn)入納米粒的疏水內(nèi)核中，制備載藥納米粒。通過改變藥物與納米粒的重量比，制備不同載藥量的樣品，然后在確定重量比的情況下，制備不同取代度的載藥納米粒，并研究了這些樣品在體外的藥物釋放情況。結(jié)果表明，加藥量越高納米粒載藥量越大，HD6納米粒的最高載藥量可達(dá)11.58％，載藥率則隨著

5、載藥量的增加而降低；取代度越高，載藥量越大，載藥率越高；三種取代度的納米粒均有較好的藥物緩釋效果，緩釋時(shí)間可達(dá)5天以上，體外藥物釋放呈三段模式，先是初期的突釋，接著是一接近勻速的釋放，最后是緩慢和持續(xù)的長(zhǎng)時(shí)間釋放，載藥量和取代度均對(duì)藥物釋放有較大的影響，載藥量越大、取代度越高藥物與納米粒內(nèi)核的結(jié)合越緊密，部分藥物在納米粒中結(jié)晶化，使得藥物釋放的突釋量降低、緩釋效果增強(qiáng)。 本文還用MTT比色的方法研究了HD納米粒的細(xì)胞毒性和不同取

6、代度的載阿霉素HD納米粒的對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的有效性，并利用熒光酶標(biāo)儀與熒光顯微鏡檢測(cè)了細(xì)胞對(duì)于熒光標(biāo)記的HD納米粒的吞噬情況。結(jié)果表明，空白HD納米粒對(duì)HeLa細(xì)胞無顯著毒性，孵育3天存活率仍在95％以上；不同取代度載藥納米粒均顯示了腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑止作用，隨取代度升高對(duì)癌細(xì)胞的殺傷率增加，載藥納米粒細(xì)胞毒性體現(xiàn)出濃度與時(shí)間的依賴性，藥物濃度為10μg/ml時(shí)，孵育3天內(nèi)三種載藥納米粒的細(xì)胞殺傷率分別達(dá)到：33.72％，41.27％，49.

7、76％，與阿霉素注射劑相比，在1-5μg/ml時(shí)HD9載藥納米粒顯示出更高的細(xì)胞毒性，在10μg/ml時(shí)亦表現(xiàn)出與其相當(dāng)?shù)目鼓[瘤細(xì)胞活性；HeLa細(xì)胞對(duì)HD納米粒的吞噬依賴于納米粒的濃度與孵育的時(shí)間，4個(gè)小時(shí)內(nèi)細(xì)胞對(duì)納米粒的吞噬呈線性增長(zhǎng)，濃度越低細(xì)胞的吞噬率越高，最高吞噬率達(dá)50％以上；取代度是影響細(xì)胞對(duì)納米粒吞噬的另一關(guān)鍵因素，相同條件下，取代度越高細(xì)胞對(duì)納米粒的吞噬速度越快，效率越高，孵育時(shí)間內(nèi)有一半以上的HD9納米粒被吞噬到細(xì)胞