以透明質(zhì)酸修飾的單壁碳納米管為載體的腫瘤靶向造影劑的研究.pdf

1、近年來(lái)，惡性腫瘤的發(fā)病率逐年攀升，其早期診斷尤為重要。磁共振成像技術(shù)是臨床腫瘤診斷的重要手段之一，目前，臨床上所使用的大部分磁共振造影劑均存在弛豫效能低、特異性差、半衰期短和毒性大的缺點(diǎn)。因此，發(fā)展一種新型造影劑迫在眉睫。
　　有國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，將Gd3+沉積到短單壁碳納米管(SWCNTs)內(nèi)可以極大提高其弛豫效能。另外，SWCNTs還具有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，在結(jié)合藥物分子的同時(shí)還可以結(jié)合靶向分子，這為構(gòu)建腫瘤靶向造影劑提供了新的思路。<

2、br>　　透明質(zhì)酸(HA)是一種具有良好生物相容性、生物可降解性的天然線(xiàn)性多糖，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞表面存在多種HA特異性受體，利用HA這些特性可將其作為靶頭裝載到SWCNTs表面構(gòu)建腫瘤靶向造影劑，從而達(dá)到藥物緩釋和靶向運(yùn)輸?shù)哪康摹?br>　　本文以HA修飾的單壁碳納米管為腫瘤靶向轉(zhuǎn)運(yùn)載體，將順磁性小分子GdCl3通過(guò)物理吸附作用吸附到HA-SWCNTs載體上，構(gòu)建腫瘤靶向性Gd/HA-SWCNTs造影劑。通過(guò)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)外毒性實(shí)驗(yàn)

3、和腫瘤磁共振成像實(shí)驗(yàn)對(duì)該造影劑系統(tǒng)進(jìn)行了全面綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示Gd/HA-SWCNTs是一種高效、定向、緩釋、低毒的核磁共振造影劑。具體內(nèi)容如下:
　　1.腫瘤靶向HA-SWCNTs載體的合成及Gd/HA-SWCNTs造影劑的構(gòu)建。首先將SWCNTs通過(guò)濃硫酸和濃硝酸進(jìn)行羧基化反應(yīng)生成SWCNT-COOH，然后將HA通過(guò)亞烷基二胺為連接臂和其進(jìn)行共價(jià)相連制得HA-SWCNTs載體，通過(guò)物理吸附作用將Gd3+負(fù)載到所得載體上，經(jīng)過(guò)透

4、析即得Gd/HA-SWCNTs。通過(guò)透射電鏡、紫外全波長(zhǎng)掃描和傅里葉紅外光譜對(duì)SWCNTs的共價(jià)修飾進(jìn)行表征，通過(guò)熱重分析對(duì)所得載體進(jìn)行分析，確證共價(jià)修飾。通過(guò)不同的藥物載體比例對(duì)載藥量進(jìn)行篩選。透射電鏡、紫外光譜、紅外光譜和熱重分析結(jié)果共同驗(yàn)證了HA-SWCNTs的成功制備，其中有42.27％的HA與SWCNTs成功偶聯(lián);當(dāng)表面活性劑為10mg/ml的大豆卵磷脂，探頭超聲時(shí)間為30min，藥物載體比例為7∶1時(shí)載藥效果最好，載藥量達(dá)到

5、22.58％。
　　2.熒光顯微鏡法和細(xì)胞流式分析法考察MCF-7細(xì)胞對(duì)HA-SWCNTs載體的攝取能力。熒光顯微鏡法結(jié)果顯示，6h時(shí)HA-SWCNTs組信號(hào)達(dá)到高亮，比同時(shí)間點(diǎn)SWCNTs組信號(hào)強(qiáng);細(xì)胞流式分析結(jié)果分析可知在6h時(shí)，MCF-7細(xì)胞對(duì)HA-SWCNTs的攝取率高達(dá)97.9％，而對(duì)SWCNTs的攝取率僅為87.4％。兩種方法均驗(yàn)證了細(xì)胞對(duì)HA-SWCNTs的高攝取能力。
　　3.SRB法和HE染色法分別考察所制

6、備Gd/HA-SWCNTs的體內(nèi)外毒性。SRB法結(jié)果顯示，當(dāng)Gd3+濃度達(dá)到50μg/ml時(shí)，細(xì)胞生存率仍在90％以上，Gd/HA-SWCNTs未表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性;HE染色結(jié)果表明，當(dāng)按照Gd3+為0.72mg/kg的劑量給藥時(shí)，Gd/HA-SWCNTs對(duì)各器官均沒(méi)有毒性作用。
　　4.化學(xué)方法測(cè)定Gd/HA-SWCNTs在小鼠腫瘤部位的吸收和靶向參數(shù)，用7.0T小動(dòng)物專(zhuān)用磁共振成像儀測(cè)定該造影劑的成像性能。結(jié)果顯示:Gd/H