腫瘤還原微環(huán)境響應(yīng)的透明質(zhì)酸膠束抗腫瘤研究.pdf

1、近年來(lái)藥物傳遞系統(tǒng)（Drug Delivery System，DDS）受到廣泛關(guān)注，因?yàn)榕c傳統(tǒng)制劑相比，DDS可以減少藥物毒副作用，提高藥物治療效果，提升藥物穩(wěn)定性，提高藥物的生物利用度(bioavailability)。目前已發(fā)展建立了多種類(lèi)型的新型藥物遞送系統(tǒng)，包擴(kuò)脂質(zhì)體(liposome)，膠束(micelle)和納米粒(nanoparticle)等。但同時(shí)DDS也面臨缺少主動(dòng)靶能力和在病灶部位有效釋放活性藥物等一系列的問(wèn)題。腫瘤

2、與正常組織之間存在天然的氧化還原生理差異，即腫瘤細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境中的還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)濃度遠(yuǎn)高于正常組織（100-1000倍）。利用此種特性，本研究構(gòu)建一種能主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞CD44受體和在腫瘤高GSH微環(huán)境中觸發(fā)釋放的透明質(zhì)酸維生素E琥珀酸酯衍生物，以期實(shí)現(xiàn)DDS主動(dòng)靶向病灶部位和選擇性釋放藥物的目的。
　　以親水性的透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)為骨架，以維生素E琥珀酸酯（D-α-T

3、ocopherol acid Succinate，α-TOS）為疏水鏈段，以具有二硫鍵的胱胺（氧化還原敏感型）和己二胺（非氧化還原敏感型）為橋鏈，通過(guò)酰胺化反應(yīng)，合成了氧化還原敏感型和非氧化還原敏感型透明質(zhì)酸維生素E琥珀酸酯衍生物HA-SS-TOS(HSST)和HA-CC-TOS(HCCT)，二者臨界膠束濃度分別為48.0μg/mL和64.9μg/mL，具有良好的膠束形成能力。HSST和HCCT衍生物膠束的粒徑為114±11.6nm和1

4、08±16.2nm，電位為-20.9±4.3mV和-18.2±4.2mV。HSST和HCCT都能對(duì)紫杉醇(PTX)進(jìn)行有效包載，最高包封率和載藥量分別為88.3％，27.2％和89.7％，28.5％(w/w)。HSST在高GSH環(huán)境下快速釋放藥物，顯示出典型的氧化還原敏感性。
　　以人卵巢癌細(xì)胞SKOV3為模型細(xì)胞，HSST和HCCT在SKOV3（細(xì)胞內(nèi)高GSH濃度）和丁硫氛酸—亞諷亞胺（Buthionine sulfoximin

5、e，BSO）預(yù)處理的SKOV3（細(xì)胞內(nèi)低GSH濃度）細(xì)胞中的攝取情況無(wú)明顯差異。HSST能選擇性在胞內(nèi)高GSH濃度的腫瘤細(xì)胞中快速釋放藥物，而在低GSH腫瘤細(xì)胞中釋放緩慢。聯(lián)合使用PTX與TOS可以增強(qiáng)PTX的抗腫瘤效果，起到協(xié)同抗腫瘤的作用。由于比HCCT釋藥更快，HSST體現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞增殖抑制率和選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。
　　采用免疫印跡技術(shù)（Western blot）和免疫熒光染色(Immunofluorescenc

6、etechnique)考察了CD44受體在SKOV3，A549，S180和CT26細(xì)胞組織上的表達(dá)，結(jié)果顯示SKOV3，S180和CT26細(xì)胞組織為CD44受體高表達(dá)，而A549為低CD44受體表達(dá)，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了SKOV3/A549雙側(cè)皮下異位腫瘤小鼠模型。同時(shí)成功構(gòu)建了S180單側(cè)皮下異位腫瘤小鼠模型，S180雙側(cè)皮下異位腫瘤小鼠模型，CT26單側(cè)皮下異位腫瘤小鼠模型和CT26-Luc原位結(jié)腸癌腫瘤小鼠模型。系統(tǒng)地考察HSST膠束