腫瘤細(xì)胞表面透明質(zhì)酸在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移過程中腫瘤細(xì)胞與淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，是否是通過腫瘤細(xì)胞表面的透明質(zhì)酸(HA)與淋巴內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異透明質(zhì)酸受體(LYVE-1)的相互作用介導(dǎo)，探討腫瘤細(xì)胞表面HA對腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的生物學(xué)作用。
　　 方法：1.采用顆粒排除、免疫細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)鑒定轉(zhuǎn)移潛能不同的6株乳腺癌細(xì)胞表面HA的含量，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測其表面HA受體-CD44的表達(dá)，探尋轉(zhuǎn)移潛能、HA含量以及CD44表達(dá)三者之間的相關(guān)性。2.克隆、構(gòu)建

2、人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異透明質(zhì)酸受體-1(LYVE-1)的真核表達(dá)質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，應(yīng)用免疫細(xì)胞熒光、共聚焦顯微鏡檢測LYVE-1的表達(dá)定位，自制德克薩斯紅標(biāo)記的HA鑒定LYVE-1的結(jié)合活性，建立LYVE-1體外活化細(xì)胞模型以替代淋巴內(nèi)皮細(xì)胞。3。通過細(xì)胞粘附、平行板流動(dòng)腔等實(shí)驗(yàn)探究表面高HA乳腺癌細(xì)胞HS-578T、表面低HA乳腺癌細(xì)胞MCF-7分別與COS-7LYVE-1(+)、COS-7pEGFP-N1細(xì)胞之間的粘附差

3、異，用透明質(zhì)酸酶消化HS-578T細(xì)胞表面HA前后的粘附實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證HA介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞粘附作用。4.建立人腎近曲小管上皮細(xì)胞(HK2)表面固定形成條索狀HA(HAcables)的模型，采用HK2細(xì)胞與COS-7LYVE-1(+)、COS-7pEGFP-N1細(xì)胞之間的粘附實(shí)驗(yàn)探索HA cables是否作用于LYVE-1增強(qiáng)COS-7細(xì)胞的粘附。
　　 結(jié)果：1.轉(zhuǎn)移潛能不同的6株乳腺癌細(xì)胞表面HA的含量差異明顯。高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞HS

4、-578T、MDA-MB-231自身合成大量HA固定在細(xì)胞表面，且CD44表達(dá)很高；高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S合成相對較少HA，但表面CD44表達(dá)很高；中轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468表面HA含量很弱，也表達(dá)豐富的CD44；低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3、MCF-7表面HA含量、CD44表達(dá)均很低。2.成功構(gòu)建了人LYVE-1的真核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)鑒定轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞后，LXVE-1表達(dá)在該細(xì)胞膜上，且具有結(jié)合HA的生物學(xué)

5、功能。3.表面高HA的HS-578T乳腺癌細(xì)胞通過HA與淋巴內(nèi)皮細(xì)胞特異透明質(zhì)酸受體LYVE-1的相互作用，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與COS-7LYVE-1(+)細(xì)胞的粘附，使腫瘤細(xì)胞與其的粘附高于COS-7pEGFP-N1細(xì)胞。經(jīng)透明質(zhì)酸酶預(yù)消化HS-578T乳腺癌細(xì)胞表面HA再進(jìn)行粘附后，這種粘附差異降低。表面低HA的MCF-7乳腺癌細(xì)胞基本上不能通過LYVE-1與COS-7細(xì)胞的粘附出現(xiàn)差異。4.HA cables通過LYVE-1使HK2細(xì)胞