同型半胱氨酸通過(guò)干擾膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化.pdf

1、目的：闡明不同濃度同型半胱氨酸對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化的影響；探討LXRα在同型半胱氨酸引起脂代謝紊亂中的作用。
　　方法：以THP-1單核細(xì)胞作為研究對(duì)象，培養(yǎng)THP-1單核細(xì)胞，取對(duì)數(shù)增殖期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)，先后與佛波酯（PMA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）共同培養(yǎng)，成功復(fù)制試驗(yàn)用泡沫細(xì)胞模型，然后分別加入0、50、100、200μmol/L的Hcy，各組細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)，其中0組為對(duì)照組（不加入Hcy）。利用油紅

2、O染色（Oil Red O,ORO）檢測(cè)泡沫細(xì)胞內(nèi)中性脂滴蓄積情況。利用酶終點(diǎn)法定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（Total Cholesterol,TC）、游離膽固醇（Free Cholesterol,FC）、膽固醇酯（Cholesterol Ester,CE）的含量，觀察不同濃度Hcy對(duì)泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量的影響。利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)泡沫細(xì)胞LXRα蛋白表達(dá)，利用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Real Time-Polymerase Chain

3、 Reaction,RT-PCR）測(cè)定LXRαmRNA表達(dá)，觀察不同濃度hcy對(duì)泡沫細(xì)胞LXRα表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比較，隨著Hcy濃度的增加，ORO染色結(jié)果顯示，Hcy呈劑量依賴性地促進(jìn)了巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇的聚集。實(shí)驗(yàn)組（hcy50、100、200μmol/L）泡沫細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性百分率均較對(duì)照組升高（P<0.05），其中以Hcy100μmol/L組升高明顯。在不同濃度Hcy干預(yù)下，泡沫細(xì)胞內(nèi)TC、FC及CE含量均高于對(duì)